Analyse bactériologique d'une eau

Lysian B.

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Analyse bactériologique d'une eau

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Compte rendu de TP niveau Licence Environnement sur les différentes analyses réalisées en cours de microbiologie de l'eau.

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Toute analyse d'eau débute par le prélèvement d'un échantillon. Celui-ci doit être fait suivant des méthodes précises assurant l'absence de contamination accidentelle et la survie bactérienne.

Souvent les prélèvements se font dans des flacons en matière plastique, à usage unique, stérilisés et pouvant contenir du thiosulfate de sodium. La stérilité de chaque lot est vérifiée.

Afin que l'examen bactériologique puisse être valablement interprété, l'analyse est faite le plus rapidement possible après le prélèvement. D'après la circulaire du 21 janvier 1960, relative aux méthodes d'analyse bactériologique des eaux d'alimentations, les échantillons doivent être transportés à une température comprise entre 4°C et 6°C. L'analyse bactériologique débute dans un délai de maximum 8heures après le recueil de l'échantillon.

Suivant la norme NF T90-420 de février 1987, les échantillons sont maintenus à une température comprise entre 1°C et 4°C dès leur prélèvement et sont amené au laboratoire le jour même. L'ensemencement doit se faire le plus rapidement possible.

Après la prise d'essai, le reste de l'échantillon est conservé au réfrigérateur durant une dizaine de jours. Ceci permet en cas de résultats inattendus lors de la première lecture, d'effectuer une seconde analyse (...)

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Extraits

[...] La première étape consiste à choisir le nombre de dilution que l'on effectue sur l'échantillon. Ceci dépend de la qualité de l'eau à analyser : -Pour les eaux de baignade, en général 2 dilutions sont suffisantes, ce qui correspond à un ensemencement de 64puits à la dilution et 32puits au 1/20. Le nombre de germes qui peut être dénombré va de 15 à 3,5 x 104 germes/100mL. -Pour les eaux douces superficielles, l'échantillon est dilué 4 fois, on ensemencera donc 24 puits au puits au puits au 1/200 et 24 puits au 1/2000. [...]

[...] Les puits qui apparaissent bleus fluorescents sont considérés comme positif. Lecteur par lampe à U.V. o Streptocoques fécaux et Enterococcus (Annexe La méthode de recherche par filtration sur membrane : Dans la recherche des streptocoques fécaux, on entend essentiellement la recherche de : Enterococcus faecalis, E. faecium, E. durans, E. hirae, Streptococcus bovis, S. suis et S. equinus. Ils possèdent tous la substance acide teichoïque et appartiennent au groupe D de Lancefield. Tous ces streptocoques sont des indicateurs de contamination fécale du fait qu'ils ont tous un habitat fécal. [...]

[...] Pour la majorité des eaux, il est nécessaire de filtrer 100mL, cependant les eaux minérales (eaux embouteillées) nécessitent la filtration de 250mL. Après incubation à une certaine température et durant une durée déterminée, il est alors possible de dénombrer directement sur la membrane le nombre de colonie ayant poussées. Cette méthode présente différents avantages. Tout d'abord, elle exclue tout choc thermique lors de la mise en contact de la membrane avec la gélose. Ensuite, il est en général aisé de différencier les colonies et ainsi de les repiquer. [...]

[...] II.1- Présentation et mode opératoire Recherche des Legionella Les Legionella sont des germes de l'environnement vivant principalement dans l'eau et pouvant contaminer l'homme par ingestion et surtout par inhalation. Elles sont essentiellement recherchées et retrouvées dans les eaux de condensation des tours de refroidissement des systèmes de climatisation ou des condensateurs à évaporation forcée. Les Legionella peuvent survivre plus d'un an dans l'eau (eau de ville, Ce sont des bacilles Gram négatif, aérobies saprophytes, avec une catalase et une oxydase faible et inconstante. Legionella pneumophila est responsable de pneumonie et de la Fièvre de Pontiac. [...]

[...] Après la prise d'essai, le reste de l'échantillon est conservé au réfrigérateur durant une dizaine de jours. Ceci permet en cas de résultats inattendus lors de la première lecture, d'effectuer une seconde analyse. Présentation de l'analyse L'analyse régulière des eaux est importante car la qualité bactériologique d'une eau n'est pas un paramètre stable, mais est sujet à la fluctuation (pluie, pollution accidentelle, Les analyses doivent être effectuées fréquemment. Une analyse bactériologique n'est pas seulement qualitative, elle est aussi quantitative. Ainsi, pour les eaux polluées, les techniciens doivent parfois effectuer de nombreuses dilutions. [...]

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