L'électrophorèse

Thèmes abordés

Informatique - Électronique, électrophorèse, séparation des molécules, anode, cathode, masse globale des molécules, Western Blot, protéine spécifique

Résumé du document

Lors de cette électrophorèse, les protéines ne subissent aucune modification de conformation, elles restent fonctionnelles, d'où le terme d'électrophorèse en condition native (non dénaturante).
Le déport se fait au centre du support (souvent en cellulose). Les molécules restent à la surface du support. Les molécules négatives se déplacent vers l'anode, alors que les molécules chargées positivement se déplaceront vers la cathode.

La vitesse de déplacement dépend à la fois de la charge globale et de la masse.

Extraits

[...] Le dépôt se fait à proximité de la cathode, les polypeptide vont donc migrer vers l'anode. La vitesse de migration est inversement proportionnel à la taille de ces molécule. Une molécule petite se déplace rapidement. Plus les mailles du support sont serrer plus les molécules de grande taille se déplace difficilement. Visualisation des molécules et détermination des tailles Les molécule étudié n'absorbe pas dans le visible. Il est donc nécessaire de les révélé par une coloration spécifique , pour les protéines, on utilise soit du bleu de Coomasie, soit des sels d'argents. [...]

[...] Technique du "Western Blot": Mise en évidence d'une protéine spécifique Lors de l'électrophorèse en gel d'acryamide, les protéines sont enfermer dans un "labyrinthe" tridimensionnel qui les rend inaccessible sur le plan moléculaire. Pour acceder aux molécules, il est nécessaire de sortir les proéines du gel ou de modifier leur distribution électrophorétique, pour ains les fixé sur une membrane. Cette étape estappler "transfert". Celui-ci se fait dans un chanp électrique puisque les protéines sont déjà chargée négativement. Une fois sur la membranes, on peut loclisée la protéine recherché, pzr immuno-détection. On utilise pour cela une enzyme comme traceur, qui est révélé par son activité biologique. Cette technique est appelée Western Blot. [...]

[...] Les molécules restent à la surface du support. Les molécules négatives se déplacent vers l'anode, alors que les molécules chargées positivement se déplaceront vers la cathode. La vitesse de déplacement dépend à la fois de la charge globale et de la masse. Séparation des molécules selon leur masse globale La charge propre de la molécule n'intervient pas dans le processus de séparation,il n'y que les différences de taille qui compte. Dans ce cas ci, le support est un tamis moléculaire, ce qui implique l'utilisation de gel d'agarose ou d'acrylamide. [...]