Microscopie confocale, biphotonique

Thèmes abordés

Microscopie confocale, microscopie biphotonique, barrière d'Abbé, entité fluorescente, balayage laser

Résumé du document

Déconvolution : applicable a des images microscopique et macroscopique
Cette méthode permet d'éviter le flou, et permet une meilleure qualité de l'image observée.

Fluorescence : ppté de qqe atomes et molécules d'absorber la lumière des photons de longueur d'onde donnée pour peu après émettre une lumière des photons de moins énergie.
La phosphorescence dure plus longtemps.
Le fluorescence est une particularité de phosphorescence.

L'auto-fluorescence : objet étudié est fluorescent de par certaines de ses molécules constitutives naturelles (ex : la chlorophylle des plantes, GFP (green phosphorescente protéine) ou artificielles.

Extraits

[...] simplifie le principe de fluorescence. Les nano cristaux (quantum dot) sont très stables dans le temps. Permet d'envisager des études plus quantitatives dans le temps. En terme de bruit de fond il y a un avantage pour les quantum dot bruit de fond très faible Grande amélioration des années 60-70 : Epillumination trajet des rayons lumineux incidents par l'objectif (comme système de réflexion) Inventer pas Mr Ploemen Mise en place de filtres (excitation, d'arrêt . ) ainsi qu'un filtre intermédiaire qui est un miroir dichroïque. [...]

[...] Molécule de GFP découverte en 1961 dans la méduse Aequora Victoria et clonée en 1992. microscopie confocale a balayage laser : Développer a l'origine comme alternative au microscope fluorescent. Dans cette nouvelle microscopie : On illumine qu'un point et ce point appartenant a un plan dans l'épaisseur de la préparation. On balaye le plan méthodiquement au cours du temps. Le recours au laser a été indispensable pour générer la lumière ce qui permet de voir le point. Avantage : réglage du microscope pour observer la tranche que l'on veut. [...]

[...] Il est aussi question de dose. Si on a une forte concentration de fluorescéine on aura du vert Fluorescence apportés sur l'objet étudié : par une entité fluorescente ayant une affinité pour l'objet étudié Le DAPI qui émet en bleu a une affinité pour les structures nucléaires. par une entité n'ayant pas d'affinité pour l'objet étudié mais conjuguée à un ligand ayant cette affinité : AC qui retrouve un Ag, lectine qui retrouve un sucre dans cellule . la spécificité est due a l'Ac et la fluorescence observée permet de localiser l'Ag. [...]

[...] C'est un problème important. Avantage de l'excitation multi-photonique meilleure profondeur de perpétration du a moins de diffusion photo-toxicité réduite grâce au confinement spatial blanchissement réduit au plan focal propriété intrinsèque de sectionnement du au confinement La génération de seconde harmonie (SHG) La génération de seconde harmonique est un phénomène non linéaire de la diffusion de la lumière se produisant dans des assemblages moléculaires sans centro-symétrie (monocouche lipidique, collage, MT, myosine, ) La SHG se traduit par un doublement de la fréquence de la lumière (division par 2 de la longueur d'onde) La SHG est un processus cohérent : c a dire les photons diffusés conservent les pptés de phases des photons incident. [...]

[...] Donc c'est bien confocale. Trois mode de microscopie avec épi-fluoresence : système large champ : microscope ordinaire, on éclaire un vaste champ a l'instant t système a balayage : on éclaire un point en x/y et surtout un point en z en essentiel système confocal à disque rotatif : permet l'excitation de multiples points avec le système rotatif plus rapide. Les microscopes confocaux à balayage inclus les trous d'aiguille pour éliminer ce qui est en dehors du focus. Excitation biphotonique : 2 photons rouges qui arrive au même endroit au même moment (ou presque, il existe une tolérance temporelle et spatiale) ceci peut enclencher le déplacement de l'électron, son retour et l'émission d'un photon jaune. [...]