Le diagnostic virologique

Thèmes abordés

Diagnostic virologique, diagnostic direct, diagnostic indirect, prélèvements, sérologie virale, sérodiagnostic

Résumé du document

Deux approches possibles : diagnostic direct et diagnostic indirect
- Diagnostic direct = mise en évidence du virus ou d'un de ses composants (antigène ou acide nucléique) dans un prélèvement biologique.
- Diagnostic indirect = détection de marqueurs immunologiques produits par l'organisme en réponse à l'infection, les anticorps (= sérologie virale, sérodiagnostic).

Extraits

[...] La multiplication virale se traduit par un effet cytopathique/cytopathogène ou ECP : c'est une façon de visualiser en microscopie optique la multiplication virale. Dans ce cas, les cellules infectées en culture présentent des modifications de leur aspect normal (augmentation de volume, aspect réfringent, lyse cellulaire . ) Détection des antigènes viraux : Soit directement dans un prélèvement Soit après quelques heures de culture (16 à 72h), avant l'apparition d'un effet cytopathogène: permet au virus de se multiplier et augmente la sensibilité de détection par rapport au prélèvement initial : Immunocytodiagnostic : utilisation d'AC monoclonaux marqués dirigés spécifiquement contre un antigène viral. [...]

[...] Pour rechercher des mutations de résistance aux traitements antiviraux dans les gènes qui codent pour les protéines cibles des molécules antivirales ( VIH) II) Diagnostic indirect = sérologie virale = sérodiagnostic Objectif = caractériser les anticorps spécifiques de virus éventuellement présents dans le sérum d'un patient. Il existe plusieurs techniques permettant de détecter ces AC. Les plus utilisées sont les techniques immunoenzymatiques. ELISA = Enzyme-Linked Immuno-Sorbent Assay : Adsorption d'un antigène à la surface d'un support plastique Les AC éventuellement présents dans le sérum du patients vont se fixer à leur cible antigénique Un 2e AC lié à une enzyme se lie aux complexes Ag:AC. [...]

[...] diarrhées aiguës virales, liquide vésiculaire . Recherche de virus infectieux en cultures cellulaires : technique de référence en virologie qui permet la multiplication des virus et leur isolement en culture cellulaire. Mais : Tous les virus ne se multiplient pas sur des cultures cellulaires. Les virus que l'on peut isoler ainsi ne se multiplient pas tous sur le même type de cellules : le laboratoire de virologie doit donc utiliser plusieurs types cellulaires pour augmenter les chances d'isolement d'un virus. [...]

[...] L'enzyme catalyse la transformation d'un substrat incolore en substrat coloré. La coloration permet donc de déceler la présence d'AC dans le sérum du patient et l'intensité de la réaction colorimétrique (mesurée en Densité optique = DO) permet de quantifier les AC. Cette technique peut également être utilisée pour détecter la présence d'antigènes viraux dans le sérum d'un patient, si on remplace les antigènes par des AC à la surface du plastique (c'est le principe utilisé pour la détection de l'Ag HBs du VHB ou de l'Ag p24 du VIH par exemple). [...]

[...] Les AC éventuellement présents dans le sérum se fixent sur leurs cibles antigéniques respectives. Comme pour l'ELISA, la liaison Ag/AC est visualisée par coloration à l'aide d'un AC anti IgG conjugué à une enzyme et le substrat ad hoc apparition de bandes colorées qui permettent de déterminer le type d'AC présents dans le sérum du patient. III) Les prélèvements en virologie Phase préanalytique : Identification : Du patient : identité, âge, sexe Du prescripteur Du prélèvement : date, heure de prélèvement renseignements cliniques motivant la demande Transport : dépend de la nature du prélèvement Virus fragile = transport rapide Prélèvements sur écouvillon (sorte de coton tige utilisé pour les prélèvements nasopharyngés par exemple) : casser le coton tige dans un milieu de transport pour virus qui contient du sérum de veau foetal, des antibiotiques pour permettre la survie du virus dans le milieu extérieur. [...]