La préparation du matériel biologique

Thèmes abordés

Préparation du matériel biologique, spécimen, extraction des acides nucléiques, ADN, ARN, échantillons biologiques, sang, urines

Résumé du document

On peut utiliser beaucoup d'échantillons biologiques, le plus utilisé est le sang, car il est plus facile à prélever, soit sous forme totale ou partielle avec extraction des globules blancs. On peut aussi utiliser les urines, liquide céphalo-rachidien, morceaux organes, biopsie, tissus (tous), fœtus (cas de fausse couche), dépôts de sang sur papier buvard (chez le bébé). En médecine légale, n'importe quel prélèvement peut être utilisé (cheveux, prélèvement buccal, os, dents).

Extraits

[...] Ligases Liaison Phospho-diester, utilisé en ligature des extrémités de l'ADN lors de la construction de vecteur non convenant. Lier de façon covalente 2 mol d'ADN en 1. Formation de Liaison Phospho- diester entre e3OH et 5P. L'enzyme la plus utilisée est la T4DNAligases, indispensable bouts francs. Les autres enzyme La Ptase alcaline et la T4 Polynucleotide kinase. [...]

[...] -ADN non coupé après électrophorèse, pas migration car gros poids moléculaire -Dans l'autre cas, les fragments seront nombreux, ils se touchent cela forme un smire. -ADN de phage, tout est bien différencié, les gros fragment en hauts, les petits en bas, cela permet de connaître taille d'un fragment inconnu ( en rouge sur le schéma ) grâce à échelle de Log, on reporte les tailles connues. Utilité en cas de maladies génétiques. III- Utilisation des enzymes de restriction carte de restriction On fait une carte de restriction, on coupe un fragment en deux pour connaître emplacement du site de restriction en mélangeant les enzyme. [...]

[...] Extraits à partir cellules, tissus ou sang circulant. I Recueil du spécimen Nature du spécimen On peut utiliser beaucoup d'échantillons biologiques, le plus utilisé est le sang, car il est plus facile à prélever, soit sous forme totale ou partielle avec extraction des globules blancs. On peut aussi utiliser les urines, liquide céphalo-rachidien, morceaux organes, biopsie, tissus (tous), fœtus (cas de fausse couche), dépôts de sang sur papier buvard (chez le bébé). En médecine légale, n'importe quel prélèvement peut être utilisé (cheveux, prélèvement buccal, os, dents). [...]

[...] Pour le fragment de Klenow ( même propriété mais pas d'action exonucléasiques La Taq polymérase ( enzyme extraites bactérie source chaude, 72 d'action La Transcriptase réverse ( provient des rétrovirus, transcrit ARN en ADN complémentaire ap partir amorce Rôle: catalyser la synthèse de brin d'ADN, réplication ou réparation. Elles ont besoin d'une matrice d'ADN, d'une amorce ( sequences oligonucléotidiques complémentaires de la matrice pour faire l'élongation en utilisant des oxynucléotides La synthèse se fait pas formation liaison phosho-disester. Élongation sens 3 P 5 hydroxyle ARN polymérases Transcription ARN monobrin en ARN, pas d'amorce sens mais il faut un promoteur, l'enzyme se fixe et copie le brin adjacent. Certains reconnaissent des promoteur spé T6 T7 ou T3. Utilisé pour faire des sondes ou des techniques de séquençages. [...]

[...] On peux avoir des coupes à bouts francs ( fragment ADN avec extrémité nette ) ou a bouts cohésifs ( l'ensemble coupe entre le 2 cela libère des fragment ADN avec extrémité décalé, le réappariement spontané possible avec ce type de bouts particularité utilisé en clonage. Les ADN coupé en bouts francs pourront très difficilement se réapparié spontanément, il faudra la Particularité: sites méthylés: ADN des eucaryotes pt être métylé au niveau des cytosines CpG. Certaines enzymes ne reconnaissent pas l'ADN méthylé, pas de coupure quand les enzymes sont sensibles à la métylation. sites inclus: libération des même extrémités, on pourra réapparié des morceaux ADN. [...]