Fiche sur la microscopie

Résumé du document

PRELEVEMENT
> observation le + vite possible.
> 0,4 à 0,5 mm d'épaisseur.
> types d'échantillon = biopsie (fragment), cytoponction (liquide), pièce opératoire (organe ou portion), prélèvement à l'autopsie ou section franche (sans arracher).

FIXATION
> (...)

Extraits

[...] FICHES HISTO : microscopie 2 techniques d'observation : microscope optique maxi) microcopie électronique maxi) Etapes de préparation de l'échantillon : PRELEVEMENT > observation le + vite possible > 0,4 à 0,5 mm d'épaisseur > types d'échantillon = biopsie (fragment), cytoponction (liquide), pièce opératoire (organe ou portion), prélèvement à l'autopsie ou section franche (sans arracher) FIXATION > empêche l'hydrolyse et la putréfaction des tissus > choix du fixateur = physique ou chimique > volume du liquide, durée et température de fixation > 4 étapes = déhydratation, éclaircissement, imprégnation et enrobage >utilisation de la paraffine et du toluène (bains, élimination des graisses, durcissement de la pièce et parfois décalcification pour rendre mou) en MO, de l'EPON en ME > paraffine et coupes semi-fines en résine pour la MO > coupes ultra-fines pour la ME avec différentes machines > affranchissement (pour enlever la paraffine inutile) et eau gélatinée (pour déplisser la coupe) COLORATION > déparaffine au toluène, réhydratation/déshydratation puis liquide de montage > structures acides = colorant basique et structures basiques = colorant acide > trichrome de Masson / hémalun-éosine-safran / van gieson / bleu de toluidine / MGG (bleu de méthylène / colorants cazur / éosine INCLUSION COUPES Choix du fixateur (selon la nature et les techniques histologiques utilisées avant) : MO physiques : -congélation = protège et durcit -cryodessication = congélation + évaporation complète des petites protéines, technique lourde ! [...]

[...] ME fixation = glutaraldéhyde à + solution de cacodylate post-fixation = tétraoxyde d'osnium à pour les lipides. [...]

[...] chimiques : simples : -éthanol + méthanol, car alcool qui précipite les protéines mais durcit les tissus et solvant des graisses -formol à 10% et pH7, liaisons covalentes et parties sucrées conservées mélanges : -liquide de CARNOY (alcool + chloroforme + acide acétique), pour les petits prélèvements et préserve le glycogène -liquide de BOUIN (formol + acide picrique), hémolyse et précipitation des protéines, améliore la coloration des noyaux, préserve le glycogène mais rétracte la cytoplasme, pas de technique d'immunohistochimie et pas d'étude de l'ADN -liquide de ZENKER (bichromate de potassium + bichlorure de mercure + sulfate de sodium + acide acétique). [...]