Les méthodes d'étude en histologie

Résumé du document

Mais on ne peut pas faire le contraire : les prélèvements cytologiques ne permettent pas l'analyse de l'architecture d'un tissu, c'est à dire de voir la position dans l'espace des cellules les unes par rapport aux autres (...)

Extraits

[...] Exemples de prélèvement : * prise de sang (ponction) sang avec anti-coagulant * frottis sanguins On étale une goutte de sang ou de moelle sur une lame de verre, on sèche, puis on colore ce frottis sanguin au MGG : - bleu de méthylène > structures basophiles : ac.nucléiques, cytoplasme du lymphocyte > bleu - bleu azur > structures azurophiles : lysosomes > rouge pourpre - éosine (acide) > structures éosinophiles ou acidophiles : globule rouge (basique) > rose orangé - autres > structures neutrophiles > beige * ponction sternale pour prélever de la moelle hématopoïétique : on retrouve les éléments cellulaires de l'hématopoïèse et les cellules sanguines * biopsie ostéomédullaire avec trocart : on retrouve à la fois le contenant osseux et le contenu hématopoïétique (moelle). On peut aussi faire une empreinte cytologique. Pour faire une analyse des structures cellulaires à l'état frais le délai est d'environ 30min / 1h avant la dégradation, décomposition. [...]

[...] Une fois que le prélèvement est au laboratoire, il est examiné à l'œil nu (macroscopie) : -on sélectionne les zones à étudier -on fait une découpe de la taille d'une lame Le liquide de Bouin (fixateur jaune) montre que la découpe permet de mieux imprégner le fixateur. La macroscopie permet de mesurer la taille des tumeurs, de voir s'il y a des zones nécrotiques. Pour les prélèvements osseux, on solubilise les os (décalcification) après la fixation et avant l'inclusion / enrobage. III- Conditionnement des prélèvements inclusion et enrobage L'inclusion se fait uniquement pour les tissus, elle donne une consistance ferme permettant la découpe, plus il y a de fermeté, plus la coupe est fine. [...]

[...] On observe ces cellules grâce à des microscopes : Optique ou photonique : le plus utilisé -Il utilise une source lumineuse (visible) qui fait un trajet ascendant, en étant dirigé vers la lame par un condensateur. La lame est posée sur une platine et la lumière est captée par des objectifs qui permettent un grossissement 100 ou 150, elle est ensuite orientée, par des miroirs, vers les oculaires qui eux permettent un grossissement 10. Grossissement : 1000 à 1500. Celui-ci et les capacités d'analyses visuelles permettent un pouvoir résoluteur de l'ordre de 0.22 µm -On peut garder une trace numérique des observations grâce à un appareil numérique. [...]

[...] On peut l'utiliser pour la détection d'acide nucléique endogène ou exogène. Les sondes : - ADN clonés dans vecteurs - oligonucléotides de synthèse - ARN de synthèse (ribosondes) Les traceurs : - radioéléments, détection par autoradiographie - fluorochromes, détection par UV + caméra - métalliques, couplage de particules d'or - enzymatiques, détection par réaction colorée - marquage froid (biotine ou digoxigenine) Ex : diagnostic d'une translocation réciproque dans une tumeur : fusion des signaux sur chromosomes transloqués On peut coupler la FISH interphasique et l'IHC. [...]

[...] coloration standard Les cellules n'ont pas de coloration naturelle, sauf si elles ont des pigments Ex : mélanine pour les cellules de la peau, hémoglobine pour les cellules rouges, et myoglobine pour les cellules musculaires. Coloration standard, HES : trichrome - colorant basique : hématéine > noyau (ac. nucléique) : basophile > bleu-violet - colorant acide : éosine > protéines : acidophiles > rose - safran > fibre conjonctive collagénique > jaune MO TF TFX 2. Coloration spéciales colorations vitales : elles permettent de tester la vitalité cellulaire -test d'exclusion au bleu Trypan où les cellules non colorées sont viables -coloration au bleu de Crésyl : on peut distinguer les réticulocytes (RER) des GR (par rapport au MGG) -coloration au bleu de Toluidine : amas de RER et de polysomes (corps de Nissl) MO TF TFX colorations métalliques : -méthode à l'argent et à l'or : elles permettent de colorer les corps cellulaires des neurones et prolongements neuronaux (neurite) -coloration argentique : réticuline (fibre de collagène de type III) MO ME TF TFX colorations histochimiques C'est une coloration biochimique qui permet la caractérisation in situ d'une substance cellulaire ou inter cellulaire. [...]