Cours d'introduction à la cytologie

Résumé du document

[...] Antonie Van LEEUWENHOEK (XVII)

Fils d'un drapier hollandais. Dans la draperie, on utilise des perles. Il a créé le premier microscope avec une plaque de métal percée d'une perle et une aiguille de l'autre coté. Il a dessiné les animalcules (=particules qui ressemblent a des animaux). C'est le premier à avoir observé des organismes unicellulaires.
Micros= petit et scope=observer =>observer ce qui est petit

Robert Hooke (XVII)

Il invente un microscope un peu plus compliqué. Il va observer des petits bouts de lièges et y a vu des cavités qu'il appelle cellule. C'est la naissance de la biologie cellulaire

[...] Observation au microscope photonique ou optique
Le microscope photonique car il est traversé par des photons.
2 lentilles :
- Objectif près de l'échantillon (entre x5 et x10)
- Oculaire près de l'oeil (x10, x20, x30, x50, x100)
La lumière vient d'une source lumineuse ou d'un miroir et traverse l'échantillon.
On a la visse macrométrique et la visse micrométrique pour faire la mise au point.
Le grossissement : rapport entre les dimensions apparentes de l'objet et ses dimensions réelles. Les microscopes photoniques grossissent jusqu'à 1500 fois la taille de l'objet.
Pour calculer le grossissement : objectif x oculaire
Les objectifs x50 et x100 sont souvent des objectifs à immersion, ils s'utilisent dans l'eau ou dans l'huile

[...] Microscopie à immunofluorescence
On utilise de la lumière ultraviolette car les UV sont capables d'exciter les fluorochromes (=molécule qui devient fluorescente à la lumière UV)
Fluorescéine (FITC) (vert), rhodamine (rouge)
Ces molécules jouent le rôle de marqueur et sont attachées à une molécule biologique (ici Ac)
Un Ac est une glycoprotéine synthétisé par les lymphocytes B (LB). Un LB est une cellule à très gros noyau (globule blanc). Les Ac reconnaissent spécifiquement un Ag. Des qu'un organisme est en contact avec quelque chose d'étranger, il développe des Ac. (...)

Extraits

[...] Les Ac sont fabriqués en laboratoire. On pique une souris avec un parasite et elle fabrique les Ac de souris anti parasite. On marque cet Ac avec un fluorochrome. L'Ac se fixera sur le parasite et avec les UV, le parasite sera fluorescent. Au lieu d'utiliser des Ac, on peut aussi utiliser des enzymes (marquage enzymatique), des enzymes et des Ac (marquage immunoenzymatique), des marqueurs radioactifs (radiomarquage). On peut faire des doubles marquages (Ac anti noyau et Ac anti cytosquelette (actine, tubuline)) Observation au microscope électronique On peut utiliser des marqueurs métalliques : or, ferritine On n'utilise jamais de frotti. [...]

[...] Elle permet de voire des détails qui sont invisibles avec la microscopie à fond clair cependant on voit moins bien, elle est donc complémentaire. Microscopie à contraste de phase Les cellules ne sont pas colorées car on ne voit pas les couleurs. Elle accentue les variations de densités. Effet en relief. On l'utilise pour observer des cellules vivantes (culture in vitro) Microscopie à interférences = Nomarski C'est un type particulier de microscopie à contraste de phase. Cellules en relief en fonction des densités. Microscopie confocale C'est la plus performante. Microscope relié à un ordinateur. On effectue des coupes optiques virtuelles (scanner). [...]

[...] Introduction à la cytologie Définitions Bios= vie Logos= étude La biologie est l'étude de la vie, l'étude de tous les êtres vivants : animaux, végétaux, champignons . Ce terme apparait au début du XIX et est définit par Lamarck qui est un biologiste français qui a travaillé sur l'évolution. Les 5 règnes du vivant: - végétaux - animaux - mycètes (champignon), - protozoaires (une seule cellule) ex : toxoplasme, paludisme, les amibes Le Plasmodium est le nom latin du parasite - monères (les bactéries), ce sont des procaryotes, ils n'ont pas de noyau Eucaryote = être vivant avec un noyau Et a coté de ces 5 règnes, il y a les virus, ce sont des organisations cellulaires. [...]

[...] Ce qui est dense se trouve dans le culot. Centrifugation en gradient : on met dans le tube une solution visqueuse (saccharose, chlorure de césium) et on obtient un gradient de densité avec les particules les plus denses au fond et les moins denses au dessus. Fractionnement cellulaire par centrifugation différentiel : On fait une biopsie (foie) On le met dans un mixeur= homogénéisateur (Potter) qui broie toute les cellules pour obtenir un broyat On le met dans la centrifugeuse et on obtient un culot et un surnagent On enlève le culot (noyau) et on s'intéresse au surnagent. [...]

[...] Il a aussi inventé le vaccin antirabique (contre la rage) La plus grosse découverte de Pasteur c'est la destruction de la théorie de la génération spontanée : la vie peut naitre de rien Il a montré que lorsque c'est cuit et fermé, la vie n'apparaissait pas, c'est la pasteurisation. Mais l'inventeur de la vaccination est Edward Jenner (XVIII) avec le vaccin contre la variole. Les méthodes d'étude cellulaire La préparation des cellules Prélèvement de cellules ou d'un tissu Biopsie= prélèvement sur un être encore vivant Fixation Traitement pour éviter la dégradation : formaldéhyde, paraformaldéhyde, glutaraldéhyde (microscopie électronique) Le fixateur crée des ponts aldéhydiques qui figent les protéines et empêchent les enzymes de fonctionner. [...]