La cellule : quelques données élémentaires et méthodes d'étude

Résumé du document

Les virus (taille < 0,3 µm) ne sont pas des cellules. Ils sont longtemps restés mystérieux du fait de leur petite taille.
- L'observation se fait au Microscope Électronique (ME) (à partir de 1950).
- Ils n'ont pas de cytoplasme et de membrane ; ils ne peuvent pas se reproduire seul.
- Il existe deux phases pour les virus :
1) la phase parasite, où ils détournent la machinerie cellulaire.
2) la phase libre, où ils sont libres et peuvent aller infecter d'autres cellules.
- Ils n'ont pas de métabolisme propre et parasitent la machinerie cellulaire pour se reproduire. Ils utilisent tout le métabolisme de la cellule : c'est un cycle de réplication. Les virus sont des parasites cellulaires (...)

Extraits

[...] - Inclusion : on utilise des résines plastiques visqueuses qui durcissent par polymérisation ; les électrons pénétrant mal ces résines. C'est pour cette raison que l'échantillon doit être infiniment petit. - Coupes grâce à un ultra-microtome de diamant associé à de l'eau, dont le bras avance par pas de 70 nm grâce à un processus de dilatation (chaleur) des métaux. - On récupère le tout sur une grille en platine ou en or (Au). - Séchage. - Contraste par des sels de métaux lourds [plomb ou d'uranium ce qui souligne les structures. [...]

[...] - Technique indirecte ou sandwich : 1ère réaction, non visualisable : Ac + Ag 2ème réaction, visualisable : anti Ac marqué + Ac-Ac La technique indirecte est une méthode en sandwich permettant d'amplifier le signal, d'augmenter la spécificité, d'éviter les réactions croisées ou la reconnaissance du mauvais épitope. Quelques marqueurs. Lorsque l'on veut marquer 2 molécules différentes en même temps, on pratique le double-marquage : - au MO, avec 2 fluorochromes de couleur différente par exemple. - au MET, avec des billes d'or colloïdal de diamètre différent par exemple. Attention, les cellules sans noyau (les érythrocytes et les kératinocytes par exemple) n'ont pas de RNP ! [...]

[...] - Le MEB est complémentaire du MET - Le MEB est très utilisé pour l'observation des biolfilms bactériens (les biofilms bactériens correspondent à des bactéries qui se mettent en réseau. Ceci est très fréquent lorsqu'un patient contracte une maladie nosocomiale. - Enfin, même si MEB et MET sont complémentaires, le MEB est plus utilisé pour l'aspect quantitatif. Préparation : - Prélèvement - Fixation par réticulation - Forte déshydratation - Pulvérisation d'une fine couche d'or (ou platine) recouvrant l'échantillon pour le rendre plus conducteur. - L'image obtenue est en 3D. La MEB ne nécessite pas de coupe et permet une vision en 3D. [...]

[...] - Pendant le temps de pulse, court, on introduit des acides aminés radiomarqués en petite quantité. - Pendant le temps de chasse, long, on introduit des acides aminés non marqués en plus grande quantité. - On arrête la migration des acides aminés à différents temps : c'est la fixation des cellules (dates déterminés). - La révélation est permise par le principe de l'émulsion photogra- phique : on met l'échantillon fixé en contact avec de la gélatine renfermant des billes d'Ag2+, que l'on recouvre d'une mince épaisseur d'aluminium. [...]

[...] La MP comporte une activité enzymatique. - Par ailleurs, les procaryotes possèdent des molécules d'adhésion sur leur surface membranaire. - Le matériel génétique est 1 long chromosome bactérien, ADN circulaire sans histones, appelé aussi nucléoïde. Les bactéries n'ont pas de noyau, mais un chromosome libre. - La cellule procaryote est capable de réplication, transcription et traduction. - Les seuls éléments présents dans le cytoplasme sont les ribosomes (les ribosomes ne sont pas des organites). - L'énergie est donnée par des chaînes enzymatiques respiratoires. [...]