Rapport Downstream - Détermination du rapport albumine/globuline

Thèmes abordés

SIIBIOC Sciences de l'Ingénieur Industriel BIOChimie, Downstream, plasma, albumine, globuline, fibrinogène, électrophorèse, protéine, agrosciences

Résumé du document

But :
- Doser l'albumine et la globuline présentes dans différentes fractions obtenues lors de leur séparation.
-Déterminer le rapport albumine/globuline et établir un bilan protéique.

Le système sanguin est constitué d'une fraction cellulaire (érythrocytes, leucocytes, plaquettes) et d'une partie non cellulaire (plasma sanguin).
Cette partie non cellulaire contient 90 % d'eau et 10 % de solutés organiques/inorganiques. La grande majorité (85 %) des matières sèches du plasma sont des protéines qui ont un rôle de transports d'aliments (lipides, acides gras, métaux, vitamines et hormones). Les 15 % restants sont des aliments organiques et des métabolites (glucose, cholestérol ...), des déchets (urée, créatine, pyruvate ...) et des sels inorganiques (Na+, K+, Cl-, HCO3-, H2PO4- ...).

Extraits

[...] Les absorbances mesurées sont données dans le tableau suivant : Tube n° Facteur de dilution Concentration albumine (mg/mL) Absorbance Blanc 1 5 1,992 0,1055 2 2,5 3,984 0,2168 3 1,67 5,976 0,2933 4 1,25 7,968 0,3869 5 1 9,960 0,4674 Graphe : L'équation de la droite d'étalonnage est : ? = 0,0467 ? + 0,0123 Le coefficient de corrélation est de 0,996, ce qui garantit une bonne linéarité entre la concentration en albumine et l'absorbance dans une gamme de 0 mg/mL à 9,960 mg/mL. [...]

[...] Après centrifugation, on sépare le surnageant (albumine) du précipité dans le culot (globuline). Les globulines sont remises en solution dans de l'eau physiologique. Dialyse : Pour doser les protéines dans le surnageant, il est nécessaire d'effectuer une dialyse préalablement afin de retirer les sels contenus dans la solution. La solution à dialyser est placée à l'intérieur d'une membrane de dialyse (fermée de chaque côté) qu'on appelle boudin de dialyse. Celui-ci est immergé dans un volume important d'eau déminéralisée sous agitation. Les pores de la membrane ont une dimension précise, suffisamment grands pour permettre un transfert de sel vers l'extérieur du boudin, mais assez petits pour éviter la perte de protéines vers l'extérieur. [...]

[...] L'erreur sur le sous-dosage des globulines sera plus conséquente que celle du surdosage de l'albumine au vu de la très faible proportion de globuline par rapport à l'albumine dans la fraction F2. Conclusion Par dosage biuret, on détermine une concentration de protéines dans le sérum de 52,860 ± 2,179 g/L. Ce sérum comprend une concentration en albumine de 30,143 ± 1,779 g/L et une concentration en globulines de 15,863 ± 0,860 g/L. Le rapport a/g déterminé est de 1,90. Les résultats de l'électrophorèse confirment la bonne séparation de l'albumine et des globulines. [...]

[...] Déterminer le rapport albumine/globuline et établir un bilan protéique. I. Principe Le système sanguin est constitué d'une fraction cellulaire (érythrocytes, leucocytes, plaquettes) et d'une partie non cellulaire (plasma sanguin). Cette partie non cellulaire contient d'eau et de solutés organiques/inorganiques. La grande majorité (85 des matières sèches du plasma sont des protéines qui ont un rôle de transports d'aliments (lipides, acides gras, métaux, vitamines et hormones). Les restants sont des aliments organiques et des métabolites (glucose, cholestérol, des déchets (urée, créatine, pyruvate, et des sels inorganiques HCO3-, H2PO4-, La totalité des protéines plasmatiques a une concentration normale variant entre 58 à 80 g/L. [...]

[...] Le rapport albumine/globuline déterminé est de 1,90 dans le sérum. Dans les cas normaux, celui-ci est compris entre 1,85 et 2. Cela est donc cohérent par rapport au sérum utilisé lors de cette manipulation. Cela semble aussi cohérent avec l'hypothèse d'un sous-dosage global des protéines lors de cette manipulation. Il ne s'agit pas d'une erreur de manipulation sur une des fractions en particulier, car cela aurait conduit à la détermination d'un rapport a/g incohérent à la théorie. Electrophorèse Sérum Culot Surnageant Contrôle BSA B. [...]