Chromatographie liquide à hautes performances

Résumé du document

Le but de la manipulation est de séparer les constituants d'un mélange contenant des phtalates de méthyle, éthyle, butyle et octyle.

Pour cela, nous aurons besoin du matériel suivant: la colonne est apolaire : la silice greffée C8 forme la phase stationnaire. Le détecteur UV a une longueur d'onde fixée à 254 nm (nous avons fait varier cette valeur afin de regarder son influence sur le spectre obtenu). La phase mobile est constituée d'un mélange d'eau et d'acétonitrile (nous avons remplacé ce dernier par de l'éthanol puis du méthanol afin d'étudier l'influence du solvant).

Extraits

[...] Chromatographie liquide à hautes performances BUT DE LA MANIPULATION : séparer les constituants d'un mélange contenant des phtalates de méthyle, éthyle, butyle et octyle. MATERIEL : La colonne est apolaire : la silice greffée C8 forme la phase stationnaire. Le détecteur UV a une longueur d'onde fixé à 254 nm (nous avons fait varier cette valeur afin de regarder son influence sur le spectre obtenu). La phase mobile est constituée d'un mélange d'eau et d'acétonitrile (nous avons remplacé ce dernier par de l'éthanol puis du méthanol afin d'étudier l'influence du solvant). [...]

[...] En revanche, à 320 nm, on observe encore les pics (la séparation est mauvaise), mais de très faibles intensités (environ 5 mV). Le spectre est un peu faussé, car on observe à partir de la quatrième minute le gradient d'élution de l'acétonitrile avec la dilution de la ligne de base. On peut en conclure que la longueur d'onde choisie en début d'étude (254 nm) était satisfaisante et se trouvait dans le bon domaine d'absorption. [...]

[...] À l'inverse, l'eau favorise les interactions soluté-phase stationnaires. Ainsi, lorsque l'on augmente la proportion d'acétonitrile dans le mélange solvant, on diminue les temps de rétention et donc le temps d'analyse. Ceci est illustré par les spectres correspondant respectivement à d'acétonitrile (tout est très vite entraîné par la phase mobile : les 2 premiers pics sont très rapprochés, le troisième est proche, le tout sortant en moins de 4 minutes) et à un programme 80/20 (acétonitrile/eau) puis d'acétonitrile (l'ajout d'eau retarde la sortie des composés, car ceux-ci préfèrent interagir avec la phase stationnaire ; ceci permet une meilleure séparation). [...]

[...] Le méthanol aurait permis quant à lui une bonne résolution dans un temps somme toute correcte pics bien séparés). Ces considérations sur les spectres sont bien entendu faites en comparaison par rapport au spectre obtenu avec le mélange acétonitrile/eau, et qui a servi à fixer les paramètres (débit, composition, durée des paliers) du programme d'élution. Modification de la longueur d'onde de travail du détecteur La longueur d'onde de travail du détecteur est choisie à 254 nm pour le mélange considéré, car à cette longueur d'onde chacun des composés du mélange absorbe suffisamment la radiation UV pour que l'on puisse quantifier l'absorption et ainsi doser chacun des composés. [...]

[...] La courbe d'étalonnage (aire des pics en fonction de la concentration) a donc été établie, cependant nous n'avons pas pu le faire nous-mêmes, car nous étions le seul groupe présent ce jour-là. Nous avons donc récupéré les résultats fournis par Mme Thienpont. Ainsi, à partir de l'aire du pic de la solution de concentration inconnue, on peut en la reportant sur la courbe d'étalonnage, en déduire sa concentration. Modification des constituants du mélange éluant Nous avons remplacé l'acétonitrile par un autre solvant : l'éthanol. Nous n'avons pu remplacer ensuite par le méthanol pour comparer, car nous étions seuls pour toutes les manipulations. [...]