Contribution à l'étude de la conformation des protéines : effets de quelques facteurs physiques sur la fluorescence de la peroxydase de raifort

Thèmes abordés

Mémoire, synthèse de produits, fer, enzymes, acide, domaine, composé bioactif sensible, procédé de synthèse, carbonate de fer, oxyde de fer, sulfure de fer, protéines, peroxydase de raifort, aminoacides, conformation des protéines, spectroscopie de fluorescence

Résumé du document

L'un des axes de recherche actuels de notre laboratoire concerne l'étude de la dynamique conformationnelle des protéines par spectroscopie de fluorescence, ce qui nécessite des investigations préalables relatives à l'effet de l'environnement sur la fluorescence des acides aminés aromatiques.
Nous montrons expérimentalement que l'intensité de fluorescence, la longueur d'onde d'excitation maximale et la longueur d'onde d'émission maximale du tryptophane et de la tyrosine sont influencées par les facteurs environnementaux (concentration, présence d'un autre acide aminé fluorescent, pH, présence d'ions nitrate, solvant).

Extraits

[...] Simep. Paris. Morawski, B., Lin, Z., Cirino, P., Joo, H., Bandara, G., et Arnold, F.H. (2000). Functional expression of horseradish peroxidase in Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris. Protein Eng 377–384. NOAH NGAMVENG, J., OLSCHWANG, D., et AVOM, J. (1995). La matière. Volume Stucture et modèle. Presses Universitaires, Yaoundé. PP. [...]

[...] Chapitre IV DISCUSSION ET CONCLUSION Nous avons obtenu des données quantitatives et qualitatives au sujet de l'effet de quelques facteurs environnementaux sur la fluorescence du tryptophane et de la tyrosine. La fluorescence de la phénylalanine est très faible et donc difficile à étudier. Nous avons par ailleurs étudié l'accessibilité du Tryptophane 117 aux ions nitrate et aux molécules de solvant dans la peroxydase de raifort. La fluorescence du tryptophane et de la tyrosine varie avec la concentration. L'augmentation de la concentration du tryptophane entraîne l'augmentation du nombre de photons émis, jusqu'à un certain seuil. [...]

[...] Biophys. J 2093-2109. WEIL, J.H. (1997), Biochimie générale. 9e édition. Masson, Paris. PP. 1-75. WELINDER, K.G. (1976). Covalent structure of the glycoprotein horseradish peroxidase (EC Febs Lett 19–23. WELINDER, K.G. [...]

[...] Nous pouvons avoir une idée de la localisation de l'unique résidu de tryptophane dans la peroxydase de raifort en étudiant l'effet des ions nitrate sur sa fluorescence. Si l'effet observé avec le tryptophane libre se produit, ce résidu se situerait à la surface de la protéine. Dans le cas contraire, il serait enfoui dans une région inaccessible à ces ions. Pour besoin de confirmation, le même raisonnement s'appliquera aussi concernant l'effet de l'eau et de l'octanol. III Effet des ions nitrate sur la fluorescence du Tryptophane 117 Nous avons étudié la fluorescence de la peroxydase de raifort et du tryptophane libre dans du tampon phosphate 10mM à pH 6,20, à (EX=300nm et à différents (EM. [...]

[...] 174-175. OHLSSON, P.I., HORIE, T., VANDERKOOI, J.M., et PAUL, K.G. (1986). Tryptophan in horseradish peroxidase. Acta Chem. Scand., B 40 257–261. PHAM, A.S., et REINHART, G.D. (2003): Quantification of allosteric influence of Escherichia coli phosphofructokinase by frequency domain fluorescence. Biophys. J 656–666. PINA, D.G., SHNYROVA, A. V., GAVILANES, F., RODRIGUEZ, A., LEAL, F., ROIG, M.G., SAKHAROV, I.Y., ZHADAN, G.G., VILLAR, E., et SHNYROV, V.L. [...]