Comment est synthétisé, dégradé les métabolites créés à partir de la tropinone?

Thèmes abordés

Métabolites, tropinone, métabolisme de la tropinone, synthèse, spectres de référence, récepteurs cholinergiques

Résumé du document

L'atropine est inhibitrice spécifique des récepteurs cholinergiques (utilisé par voie intraveineuse comme antidouleurs).

La tropinone est le substrat de deux voies une donne la hyoscyamine et une autre aux calystégines.

Pour comprendre le mécanisme de ces voies, on effectue une expérience avec comme modèle, les bactéries et les plantes.

Extraits

[...] En effet, la casse la molécule nous aurait permis d'identifier des caractéristiques. RMN : le pic représente environnement chimique de l'atome d'hydrogène et l'intégrale du pic donne la quantité d'atome d'hydrogène GC-MS : On chauffe pour vaporiser (risque de réaction). Il faut que ce soit volatile ou modifier pour que ça devienne volatile. Chromatographie liquide Le problème est que lors ne peut pas faire le film c'est-à-dire prendre des images au cours du temps. RMN cinétique Inconvénient : choisir un temps faire un film faire un suivi in vivo d'une bactérie (pseudomonas, le mutant AT3) dans un RMN définir la quantité de substrat respecter condition physiologique de la bactérie évaluer le volume (nature) du milieu, et le nombre de cellule Phase de préparation Réflexion préalable sur le matériel : le substrat est à obtenir par extraction sur la plante commandé l'isotope marqué obtenu par synthèse chimique commandé glucose 13C trop cher 13CO2 à utiliser moins cher première manipulation avec substrat non enrichi 1 ou 2g d'échantillon (Pourquoi prendre un échantillon de racine comme modèle pour la plante : culture plus petite) Dans le modèle bactérien, on fait un film pour étudier le métabolisme : Pour des conditions : Milieu : pH optimum (forme spaciale et état électronique) oxygénation température H2O pression pour tampon et milieu de stérilisation (pression/température) : autoclave sans substrat substrat est filtré car il serait dénaturé par les conditions de pression et température de l'autoclave On ajoute au milieu le substrat et la solution concentrée après avoir vérifier la solubilité de celui-ci. [...]

[...] Le proton du cycle orienté vers l'arrière a un déplacement chimique de 3.9 ppm environ. Le proton faisait partie des deux cycles a un déplacement chimique de 4.1 ppm environ. L'autre proton lié au carbon lui-même en alpha de l'hydroxyle a un déplacement de 3.3 ppm environ. Les autres protons sont dificilement dissernables sur le spectre et on un déplacement chmique entre 1.8 et 2.4 ppm. Les protons du CH3 ont un déplacementchimique d'environ 2.7 ppm. Les protons faisait partie des deux cycles ont un déplacement chimique d'environ 3.8 ppm. [...]

[...] Cela n'est pas génant car ce n'est pas un métabolisme de croissance. Sinon il faut faire une croissance préalable sur une croissance cinétique. Préparation : 250mL erlenmeyer : 1L : préparer solide 200mL (milieu solide 10g/L d'agar) 10 erlenmeyer de milieu avec 45mL de 250mL : 5mL de substrat=50mL 1 bouteille de 200mL de milieu solide (supplémentaire) On ajuste le pH et on filtre après avec du NaOH et HCl. Dissolution du substrat : 5ml à 10mg/mL : 20mL de substrat : 25mL donc on prend 500mg de substrat et on complète à 50mL. [...]

[...] Analyse de résultats : Nous n'avons pas les résultats de notre expérience mais d'une autre faite avec le même appareil : Bartholomeusz et al http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1631074807002597 On observe une diminution des pics caractéristiques de la tropinone(déplacements chimiques de 4ppm; 3ppm; 2.8 ppm; 2.6 ppm; 2.4 ppm; 1.9 ppm environ) jusqu'à disparition au bout de 22 heures. On en conclut que la molécule est consommée par le métabolisme des bactéries ce qui justifie l'attente de 24 heures dans notre expérience. Et l'apparition des pics caractéristiques de la tropine et de la pseudotropine ( 3.9 ppm; 2.7 ppm; 2.3 ppm; 2.1 ppm environ). Ces pics nouvellement apparus en diminuent à la disparition de ceux de la tropinone, ils sont donc consommés entre la 20ème heure et la 22ème heure. [...]

[...] Problème : Comment est synthétisé, dégradé les métabolites créés à partir de la tropinone? Schéma du métabolisme de la tropinone chez Pseudomonas AT3. Bartholomeusz et al http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1631074807002597 La tropinone réductase I et II catalysent respectivement : tropine + NADP+ = tropinone + NADPH ( ) et pseudotropine + NADP+ = tropinone + NADPH + (EC ) La première aboutissant à la nortropine qui par la donne la nortropinone. Cycle tropanoïque produit des ester par condensation. Boswell et al http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0031942299002939 Voici un schéma plus complet de la voie (PMT : (EC ) Putrescine N-methyltransferase; MPO : methyl putrescine oxidase; TR : tropine réductase; TAT : (EC ) Tropine acyltransferase; PAT : (EC )Pseudotropine acyltransferase. [...]