Rapport de laboratoire de biochimie : dosage de protéines solubles

Résumé du document

Lors de ce laboratoire, nous avons dosé des protéines solubles via trois différentes méthodes d'analyse :
- Mesure de l'absorbance à 280nm.
- Méthode du Biuret.
- Méthode du Biorad.
Ces trois méthodes se réalisent au moyen d'un spectrophotomètre.
Un spectrophotomètre est un appareil qui permet la mesure de l'absorbance d'une solution homogène à une longueur d'onde donnée ou sur une région spectrale donnée. L'absorbance est proportionnelle à la concentration des substances en solution si l'on se place à la longueur d'onde à laquelle la substance absorbe (arrête) les rayons lumineux. C'est pourquoi la longueur d'onde est réglée en fonction de la substance à doser.
Pour des raisons financières, nous analyserons deux protéines qui ont un faible coût de production : le lysozyme et l'albumine de sérum bovin.

Extraits

[...] Attention, il faudra trouver la bonne zone de concentration afin que la loi de Beer-Lambert soit applicable. Démarche à suivre : - A partir des solutions mères, nous allons rechercher la zone de linéarité. Pour ce faire, nous allons faire deux dilutions des solutions mères : - 10X : 10ml de solution mère que l'on porte à 100ml (dans un jaugé de 100ml). - 100X : 1ml de solution mère que l'on porte à 100ml (dans un jaugé de 100ml). [...]

[...] - Pour les deux solutions inconnues de protéines et chaque dilution, verser 0,1ml + 5ml de réactif Biorad dans un tube à essai. - Laisser complexer pendant 5 minutes. - On transvase ensuite chaque tube à essai dans des cuvettes différentes. - Faire la lecture à 595nm au spectrophotomètre Résultats Lysozyme BSA Interprétation des résultats. Lysozyme. On peut faire confiance à nos résultats étant donné que le coefficient de corrélation est très proche de 1. Grâce à l'équation de la courbe de tendance, on peut retrouver la concentration de notre solution inconnue dont on avait mesuré l'absorbance à 550 nm : A550 de la solution inconnue = 0,7387 En remplaçant y par cette valeur, on obtient un x = 0,7434 mg/ml BSA. [...]

[...] - Cuvettes visibles. - Pipettes de et 6 ml. - Spectrophotomètre. - Tubes à essai. - Réactif Biorad. - Pipette à pistons de 0,1ml Mode opératoire. - Par manque de temps, nous n'avons pas eu le temps, cette fois- ci, de déterminer nous même la zone de concentration adéquate pour que la loi de Beer-Lambert soit applicable. Dès lors, on nous dit que la zone est comprise entre 0,1mg/ml et 1mg/ml. Remarque : Etant donné que la sensibilité de cette méthode est 10 fois supérieur à celle de la précédente et que le coefficient d'extinction est très élevé, on devra diluer 10 fois plus. [...]

[...] Pour le lysozyme. - 0,05g/l 5ml de la dilution 10X portés à 100ml. - 0,1g/l (voir plus haut). - 0,2g/l 2ml de la solution mère portés à 100ml. - 0,4g/l 4ml de la solution mère portés à 100ml. - 0,6g/l 2ml de la solution mère portés à 100ml. Remarque : ne pas oublier de faire un blanc afin de calibrer le spectrophotomètre. Pour le BSA. - 0,1g/l (Voir plus haut). - 0,2g/l 2ml de la solution mère portés à 100ml. [...]

[...] - 1mg/ml 1ml de solution mère porté à 10ml. - 2mg/ml 2ml de solution mère porté à 10ml. - 4mg/ml 4ml de solution mère porté à 10ml. - 6mg/ml 6ml de solution mère porté à 10ml. - 8mg/ml 8ml de solution mère porté à 10ml. - 10mg/ml 10ml de solution mère porté à 10ml. Pour le BSA. - 1mg/ml 1ml de solution mère porté à 10ml. - 2mg/ml 2ml de solution mère porté à 10ml. - 4mg/ml 4ml de solution mère porté à 10ml. [...]