Techniques de biochimie clinique et procédés de séparation

Thèmes abordés

Pharmacie - Santé - Social, Techniques de biochimie clinique, procédés de séparation, électron et libération d'énergie, fluorescence, photodécomposition, luminométrie, mécanismes moléculaires

Résumé du document

Lorsqu'un électron excité retourne à l'état fondamental, il y a libération d'énergie. Parfois, toute l'énergie absorbée par l'électron n'est pas restituée, de sorte que la radiation émise a une énergie inférieure, donc une longueur d'onde supérieure à la radiation absorbée. C'est la fluorescence. Lorsque la quantité de lumière absorbée est très petite (environ 5 % de la lumière incidente), l'intensité de la fluorescence est proportionnelle à l'intensité de la lumière d'excitation I0, au coefficient d'extinction moléculaire, à la concentration du soluté fluorescent c, au trajet optique de la solution l, et au rendement quantique de la fluorescence Q.

Par ailleurs, l'intensité de fluorescence varie aussi avec les facteurs de l'environnement (pH, température, nature du solvant, photodécomposition des molécules fluorescentes). Des lumières parasites de diverses origines peuvent aussi perturber la mesure : l'effet Tyndall qui est la diffusion par des particules en suspension d'une lumière de même longueur d'onde que la lumière incidente ; l'effet Rayleigh qui est une réémission d'une lumière absorbée par les cuves, les solvants ou les solutés ; et l'effet Raman qui est une réémission d'une lumière de longueur d'onde constante, quelle que soit la longueur d'onde incidente, et due au solvant.

Extraits

[...] En fluorimétrie, la lumière réémise est généralement étudiée sous un angle de 90°. Mais on peut théoriquement étudier la réémission dans d'autres directions : Schéma simplifié d'un spectrofluorimètre (HAMON et al., 1990). Les flèches pleines représentent la lumière émise par la source et les flèches en traits interrompus représentent les radiations de fluorescence. Autres variantes de la fluorimétrie Polarisation de fluorescence Dans cette méthode, on excite le fluorophore avec une lumière polarisée linéaire. Plus le composé est libre et mobile, plus la polarisation de la lumière réémise est faible. [...]

[...] Cette technique, utilisée dans les dosages immunologiques, est automatisée et permet d'avoir le résultat d'un dosage en 20 mn. La polarisation de fluorescence est également utilisée pour mesurer la fluidité d'une membrane biologique ou d'une couche lipidique d'une lipoprotéine à l'aide de sondes hydrophobes fluorescentes. Fluorimétrie en temps résolu Un éclair excite la solution et la fluorescence n'est mesurée qu'après un certain délai, si possible quand la lumière incidente, le bruit de fond et la lumière diffusée ont disparu. On augmente ainsi la sensibilité de l'analyse. [...]

[...] Fluorimétrie Principe Lorsqu'un électron excité retourne à l'état fondamental, il y a libération d'énergie. Parfois, toute l'énergie absorbée par l'électron n'est pas restituée, de sorte que la radiation émise a une énergie inférieure, donc une longueur d'onde supérieure, à la radiation absorbée. C'est la fluorescence. Lorsque la quantité de lumière absorbée est très petite (environ de la lumière incidente), l'intensité de la fluorescence est proportionnelle : - à l'intensité de la lumière d'excitation I0 - au coefficient d'extinction moléculaire ε - à la concentration du soluté fluorescent c - au trajet optique de la solution l - au rendement quantique de la fluorescence Q I = I ε . [...]

[...] Chromatographie d'exclusion - diffusion où la phase stationnaire (poreuse) se comporte comme un tamis et sépare les composés en fonction de leur taille; on parle aussi de chromatographie de perméation de gel ou de gel filtration ; La chromatographie de paire d'ions : On forme une paire d'ions entre les constituants ionisés du mélange à analyser et un contre-ion (par exemple alkyl-ammonium). Les paires vont se distribuer entre les phases mobiles et fixes. La chromatographie d'affinité : Contrairement aux autres types de chromatographie où le support est polyvalent, la chromatographie d'affinité nécessite la préparation d'un support spécifique de la molécule à purifier : on fixe sur un support (gel, résine généralement par l'intermédiaire d'un bras, une molécule présentant une affinité pour la molécule à purifier (substrat, anticorps, récepteur, inhibiteur, etc . [...]

[...] Cette technique a une grande sensibilité. Les avantages de la turbidimétrie et de la néphélométrie résident dans le fait que les résultats sont obtenus en un temps très court et qu'elles peuvent être complètement automatisées. Lorsque le nombre de malades à examiner est relativement faible, la technique de Mancini reste probablement la méthode de choix. Cependant, si le nombre de malades est élevé et qu'on dispose d'un néphélomètre, la néphélométrie est utile. La luminométrie La mesure d'une lumière émise par l'échantillon est théoriquement possible sur un photomètre classique, Mais en général, la sensibilité est insuffisante et il est préférable d'utiliser un appareil spécial, le luminomètre. [...]