Travaux pratiques de microbiologie générale

Thèmes abordés

Sciences biomédicales, Micro-organisme, microscope, population microbienne, PCA Plate Count Agar, GAM germes aérobies mésophiles, eau peptonnée, eau distillée, boite de pétri, coloration de Gram, frottis, incubation

Résumé du document

Les micro-organismes sont des êtres vivants ubiquistes. Il en existe une diversité. Notre manipulation aura pour but la mise en évidence de micro-organismes, la familiarisation à l'utilisation du microscope, l'application des techniques de coloration et l'estimation d'une population microbienne.

Extraits

[...] Tubes contenant les solutions d'eau peptonnée Après cela, il faut cinq boites de pétri stérile numérotées (B0 à B4). Utiliser la dernière pipette qui a servi à la dilution pour prélever 1 ml de la solution d'eau peptonnée contenue dans les tubes à essai en partant de S4 (moins concentré) à S1 (Plus concentré) et les mettre respectivement dans les boites de pétri (B4 à B1). B0 étant le témoin, il ne subit pas cette expérience. Il faut maintenant couler le milieu PCA préparé dans chacune des boites de pétri en prenant le soin d'homogénéiser à chaque fois. [...]

[...] Sur les milieux, il y a développement de micro-organismes : Boite I : L'atmosphère autour de la fenêtre du laboratoire est pleine de micro-organismes. Donc le développement n'est pas surprenant. Boite II : Le milieu est ensemencé avec des cheveux et cela aboutit à une pousse de micro-organismes. Ce qui traduit le fait que les micro-organismes sont aussi présents dans les cheveux Boite III : Le développement du milieu ensemencé à l'aide d'un prélèvement sur des boucles d'oreilles nous permet de conclure que ces boucles d'oreilles contiennent des micro-organismes. Boite IV : Le milieu est scindé en quatre (A. [...]

[...] Elle permet de distinguer les bactéries Gram- des bactéries Gram[+]. Réalisation de frottis Pour la réalisation d'un frottis bactérien, il faut suivre les étapes suivantes : -Se munir d'une lame de verre propre. - Ajouter une petite goutte d'eau distillée stérile sur la lame -Prélever une très petite quantité de bactéries avec une anse ou une aiguille d'inoculation - Mélanger bien cette quantité avec l'eau distillée stérile et étaler le mélange très finement sur la lame en faisant des mouvements circulaires. [...]

[...] L'observation se fera au microscope optique. Elle nous permettra de mettre en évidence la forme et la mobilité des bactéries. Les étapes à suivre pour l'observation à l'état frais sont les suivantes : -Se munir d'une lame de microscope propre et d'une lamelle -Allumer la flamme du bec bunsen pour créer une zone stérile -Désinfecter la lame et la lamelle à l'alcool -Sélectionner une boite de pétri de notre choix (une contenant des Colonies de microorganismes particulièrement) -Poser une goutte d'eau distillée stérile à l'aide d'une pipette pasteur sur la lame Figure 7 : Étapes du montage entre lame et lamelle -Utiliser une anse d'inoculation (stérilisée jusqu'au rouge à la flamme du bec bunsen puis laisser refroidir) ou une pipette pasteur (stérilisée à la flamme du bec bunsen) pour prélever l'inoculum dans la boite de pétri choisie.-Mettre l'inoculum dans la goutte d'eau et mélanger - Recouvrez délicatement avec une lamelle : posez la lamelle sur un côté très près de la goutte d'eau, abaissez lentement et faites glisser tout en évitant les bulles d'air Montage à l'état frais -Nettoyez l'excès de liquide sur la lame avant de la placer au microscope Notre montage entre lame et lamelle est maintenant prêt pour être observé au microscope. [...]

[...] Interprétation OBJECTIF L'objectif de cet ensemencement est de déterminer la concentration en bactérie contenue dans l'inoculum. MÉTHODES Préparation d'eau peptonée tamponnée (EPT) et de PCA Eau peptonée Sur le flacon contenant l'eau peptonée Tamponnée, il est marqué «1L pour 20g». Pour notre manipulation, il nous faudra peser 6g d'eau peptonée correspondant à 300 ml d'eau distillée. Figure 1 : Flacon contenant de l'eau peptonée Peser 6 g d'eau peptonée à l'aide d'une balance et transvaser dans un bocal contenant 300 ml d'eau distillée mesurée à l'aide d'une éprouvette graduée de 500 ml. [...]