TP de physiologie animale: étude du rein

Résumé du document

La présence de CO2 dans le sang est une des résultantes essentielles de l'activité métabolique cellulaire. De cette activité résulte par ailleurs une production de H+ et d'acides non négligeables, largement suffisants pour faire descendre le pH sanguin à des valeurs rapidement incompatibles avec la survie cellulaire si l'organisme ne présentait pas de systèmes de régulation.
Afin de maintenir l'équilibre acido-basique de l'organisme, des systèmes tampons efficaces (système H2CO3/HCO3-, protéines/protéinates et le système H2PO4-/HPO42-) agissant rapidement et à court terme, et des mécanismes d'élimination de protons, sont nécessaires.

Extraits

[...] Après avoir déterminé tous ces paramètres, il nous sera alors possible de calculer la valeur des concentrations en H2PO4- et HPO42- dans les urines et ainsi calculer la valeur du pH urinaire théorique, c'est-à-dire la valeur de pH attendue si notre hypothèse de départ est vraie. Si la valeur de pH urinaire théorique diffère de celle mesurée lors du prélèvement urinaire chez le lapin, on pourra alors rejeter l'hypothèse testée. MATERIELS ET METHODES Préparation du lapin Après pesée, on canule une jugulaire du lapin dans laquelle 0.5 mL d'héparine sont injectés (l'héparine est un anticoagulant qui permet d'éviter la coagulation sanguine induite par l'intervention chirurgicale). [...]

[...] Un volume de 1ml des surnageants des 4 échantillons serviront au dosage après ajout de 2 ml de réactif. On dose également 3 solutions étalon à et 4 mg/L avec ajout de 2 ml de réactif), dont la valeur de DO nous permettra de tracer une droite d'étalonnage nécessaire à la mesure des concentrations en phosphates de chacun des échantillons P2, U1 et U2). Un tube blanc contenant 1ml d'eau distillée est également préparé. La totalité des tubes est incubée au bain-marie à 37°C pendant 1 heure pour développer la coloration puis la densité optique est mesurée au photocolorimètre à 700 nm. [...]

[...] Dosage de l'inuline Les échantillons de plasma et d'urine attribués à ce dosage sont déprotéinisés. Pour cela, on ajoute à 0.5 ml de plasma ou 0.5 ml d'urine diluée au 1/10e : 7.5 ml d'eau 1.5 ml de ZnSO ml de NaOH 0.5 N Ces solutions sont alors filtrées. Le dosage se fait par ajout de 1ml de réactif de Seleevanoff puis de 7ml d'HCl 30% à : 1ml d'eau (Blanc) 1ml de solution étalon inuline ( 0.05 mg/ml) 1ml de filtrat d'urine ou de filtrat d'urine dilué 2 fois 1ml de filtrat de plasma ou de filtrat de plasma dilué 3 fois La DO est lue au photocolorimètre à 520 nm après incubation des tubes préalablement préparés au bain-marie pendant 10 min. [...]

[...] Prélèvements Le volume d'urine prélevé servira pour : 2.5 ml au dosage de l'ammoniac après ajout de 2 gouttes de H2SO4N dans un tube à hémolyse 500 µl au dosage des phosphates 2.5 ml à la mesure du pH et de l'acidité titrable 300 µl au dosage de l'inuline À noter que le débit urinaire sera mesuré grâce à la durée du prélèvement ainsi qu'au volume recueilli. Le prélèvement de sang sera, quant à lui, centrifugé à 3500 tr/min pendant 10 min afin d'en recueillir le plasma nécessaire pour le dosage des phosphates ( 0.5 ml de plasma) et le dosage de l'inuline. Mesure de l'acidité titrable On titre, après mesure du pH urinaire, l'urine par la soude 5mM en faisant couler la soude goutte à goutte. [...]

[...] L'hypothèse de départ ne prend pas en compte cette transformation et ne se basait que sur la réabsorption sélective des phosphates dibasiques. Ainsi, nous pouvons rejeter l'hypothèse testée dans cette expérience, celle-ci ne prenant pas en compte le déplacement de l'équilibre précédant. De plus si nous ne pouvons pas calculer le pH théorique via la formule pH = pka + log (dibasique/ monobasique) nous pouvons essayer de la faire avec la formule pH = log Il y a autant de P2- réabsorbé que de si l'on ramène cela à l'unité internationale on arrive à un pH d'environ ce qui est loin de notre pH expérimental. [...]