Rapport génétique : amplification du gène PV92 par PCR

Thèmes abordés

SIBIOC Sciences de l'Ingénieur Industriel Biochimie, biochimie, agrobiosciences, échantillonnage, électrophorèse, génome, dénaturation, hybridation, élongation

Résumé du document

Le but de l'exercice est de mettre en évidence la présence de la séquence ALU sur le gène PV92 du chromosome 16 par PCR/électrophorèse à partir de cellules buccales et de cellules de bulbes de cheveux.

Extraits

[...] En comparant la distance de migration de ces fragments avec celle des fragments contenus dans les échantillons, on peut calculer leur taille. Lorsque tous les échantillons sont placés, on met la cuve sous tension. L'ADN, chargée négativement par la présence des groupements phosphates, migre vers la borne positive. Au plus le fragment a une taille importante, au plus sa distance de migration est faible. À la fin de l'électrophorèse, le gel est placé dans une solution de Gel Red, un agent intercalant qui vient se fixer dans les molécules d'ADN. Sous ultra-violet, les molécules d'ADN deviennent alors fluorescentes. [...]

[...] Les volumes prélevés sont ci-dessous : Les amorces ont été ajoutées en amont au Master Mix. Électrophorèse Après l'électrophorèse, on obtient les résultats suivants : Analyse du gel Marqueur de poids moléculaire Le marqueur de poids moléculaire utilisé est le EZ load. Il contient des fragments d'ADN de 5 tailles différentes : 100 pb pb pb pb et pb. Contrôles Pour le contrôle négatif, on ne distingue aucune bande sur le gel. Cela est cohérent avec la théorie car le tube ne contenait pas le gène PV92. Aucune séquence d'ADN n'a pu être amplifié. [...]

[...] Il ne devrait pas y avoir de problèmes liés à la PCR ou à l'électrophorèse pour les échantillons. Échantillons Pour l'ADN provenant des cellules buccales, il n'y a aucune bande distinguable sur le gel. La cause est probablement un trop faible nombre de cellules récupérées. La seule bande visible se situe aux alentours de 100 paires de bases, il s'agit d'une bande supplémentaire liée à l'association d'amorces deux par deux. Pour l'ADN provenant des follicules de cheveux, on distingue 5 bandes. [...]

[...] Celles-ci pourraient gêner le bon déroulement de la PCR. PCR La PCR (Polymerase Chain Reaction) est une technique de biologie moléculaire largement utilisée pour amplifier de manière exponentielle une région spécifique d'ADN. Pour cela, on doit ajouter à l'ADN cible un Master Mix contenant les nucléotides (dNTP), l'ADN polymérase, les ions Mg2+ et les amorces spécifiques au gène PV92. La PCR fonctionne en une répétition d'étapes sous forme de cycle : Étape 1 : Dénaturation La première étape de la PCR consiste à chauffer l'échantillon d'ADN à une température élevée (94°C). [...]

[...] Rapport génétique : amplification du gène PV92 par PCR But Mettre en évidence la présence de la séquence ALU sur le gène PV92 du chromosome 16 par PCR/électrophorèse à partir de cellules buccales et de cellules de bulbes de cheveux. Principe Extraction de l'ADN génomique L'extraction est réalisée sur des cellules buccales et des cellules de bulbe de cheveux. Pour les cellules buccales, celles-ci sont préalablement placées dans une solution saline et centrifugées afin de séparer les cellules d'autres composants récupérés avec l'écouvillon. [...]