Fractionnement cellulaire, isolement et caractérisation des mitochondries

Résumé du document

Il s'agit d'un TP de biologie cellulaire ayant pour objet d'étude "le fractionnement cellulaire, l'isolement et la caractérisation des mitochondries".
Ce document particulièrement clair, exhaustif et structuré fait neuf pages.

Extraits

[...] Les électrons libérés par cette réaction transitent du complexe II au complexe III, puis au cytochrome et sont finalement absorbés au niveau du complexe IV par la réduction du dioxygène en eau. Le trajet des électrons à travers cette chaine de transport a pour conséquence de faire passer des protons de la matrice mitochondriale vers l'espace intermembranaire. La membrane mitochondriale interne étant imperméable aux protons, il se créé un gradient de protons de part et d'autre de la membrane. La tendance des protons à repasser vers la matrice pour équilibrer les concentrations constitue la force protomotrice. [...]

[...] Ces réactions produisent aussi du pouvoir réducteur, sous forme de NADH (Nicotinamide Adénine Dinucléotide, forme réduite), en réduisant le NAD (Nicotinamide Adénine Dinucléotide, forme oxydée). Les réserves cellulaires de NAD étant limitées, il est nécessaire de le régénérer pour permettre à la cellule de poursuivre la dégradation du glucose par glycolyse. En absence de dioxygène, lors de la fermentation, la cellule reconvertit le NADH en NAD par un processus qui ne produit pas d'ATP. Toutes les étapes de la fermentation se passent dans le cytoplasme. En présence de dioxygène, la respiration peut avoir lieu. [...]

[...] Cette dégradation produit aussi du pouvoir réducteur, sous forme de NADH et de FADH2 (Flavine Adénine Dinucléotide, forme réduite). Une des particularités de la respiration est que le pouvoir réducteur est converti en énergie au niveau de la membrane interne de la mitochondrie. La membrane mitochondriale interne héberge des complexes de protéines à activité redox qui constituent la chaine respiratoire. Pour l'essentiel, ce sont les complexes II, III, le cytochrome c et le complexe IV. - Le NADH produit par la glycolyse et le cycle de Krebs est reconverti en NAD par le complexe I. [...]

[...] Le cyanure de Na (solution fraîche) sera mis dans les cuves par l'enseignant. ( Poison violent) Cuve 1 Cuve 2 Cuve 3 (blanc) Cyanure 0,2 ml Succinate 0,2 ml 0,2 ml Cytochrome C oxydé 0,2 ml 0,2 ml Tampon phosphate 1,2 ml 1,4 ml Fraction mitochondriale 0,2 ml 0,2 ml Volume total 2 ml 2 ml 2 ml Dès que vous êtes prêt à faire les mesures de densité optique, réchauffez dans vos mains le tube contenant la fraction mitochondriale. [...]

[...] note : lors de vos recherches sur Internet, soyez conscients que le contenu des sites n'est pas contrôlé et que les informations de certains sites peuvent être fausses. Soyez donc vigilants quant aux références des sites dont vous tirerez vos informations. En cas de doute, vous pourrez faire contrôler vos informations par les enseignants, lors de la séance de TP. - Recherchez quel est le rôle du cyanure. - Commencez la mise en forme du compte-rendu. - Préparez les outils qui vous permettront de tracer les graphes de la partie « résultats ». Commencer la rédaction des parties 1°) et 2°) (cf. [...]