Etude de survie d'S.Enterica à PH acide et au stress oxydatif après exposition préalable à l'acétate et NaCl

Résumé du document

The objective of the manipulation was to study the survival of S.Enterica in oxidative and acid oxidative after preliminary exposure in the acetate. To do so we followed by measuring absorance bacterial growth under exposure to acetate for 1 hour and then we added citric acid or hydrogen peroxide at different concentrations. Finally after a time of development we made dilutions
of the suspension to determine in which concentration bacteria start again his development. And thus determine the survival rate.

Extraits

[...] Les gènes de la bactérie lui permettant de s'adapter à son environnement. [...]

[...] Salmonelle enterica est une bactérie aérobie flagellée mesurant entre 2 à 5um, c'est une bactérie entérobactérie Gram-. Elle se développe principalement dans les organismes des individus à sang chaud. Cette entérobactérie est la cause de nombreuses maladies chez l'espèce humaine comme la fièvre thyphoïde, la fièvre paratyphoïde et la salmonellose. La transmission de ces souches passe principalement par la consommation ou la manipulation d'aliments contaminés. S.Enterica comprend 2610 sérotypes différents, avec certaines souches assez virulentes. C'est une des bactéries les plus étudiées à ce jour puisque sa culture est simple : elle réalise une division cellulaire toutes les 20minutes à 37°C dans un milieu riche. [...]

[...] Le dernier facteur de dilution FD2 est donc de 10. UFC/mL=nombre de cellule sur la gélose Volume dilution gélosexFD1x FD2 Tableau avec les UFC/mL des différentes géloses Erlenmeyer Témoin Avec 25mM d'acétate Avec 50mM d'acétate Avec 100mM d'acétate Contrôle (4mL d'eau physiologique) 1,08.10[10] 1,13.10[9] 1,06.10[10] 1,16.10[9] Stress acide (4mL d'acide citrique) 7,13.10[5] 1,27.10[7] 9,64.10[7] 1,64.10[7] Stress oxydatif (3,95mL d'eau physiologique + 50uL d'H2O2) 7,01.10[5] 5,78.10[6] 5,29.10[6] 4,47.10[7] Stress oxydatif (3,975mL d'eau physiologique + 25uL d'H2O2) 3,53.10[5] * Calcul du pourcentage de survie de S.Enterica nombre UFC/mL expérimentalesnombre UFC/mL dans le contrôlex100 Erlenmeyer Témoin Avec 25mM d'acétate Avec 50mM d'acétate Avec 100mM d'acétate Stress acide (4mL d'acide citrique) 100% (théorique) 1,05.10[1]% (Soit 10,46%) 9,82.10[1]% (Soit 98,15%) 1.07.10[1]% (Soit 10,74%) Stress oxydatif (3,95mL d'eau physiologique + 50uL d'H2O2) 6,60.10[-3] 9,09.10[-1]% (Soit 0,909%) 1,41% Stress oxydatif (3,975mL d'eau physiologique + 25uL d'H2O2) 6,49.10[-3]% 5,12.10[-1]% (Soit 0,512%) 4,99.10[-2]% (Soit 3,85% Conclusion : En condition acide la croissance se trouve affectée suite à l'augmentation progressive de l'acidité la croissance est ralentit. [...]

[...] Ce sont donc des molécules très instables et chimiquement réactives qui peuvent être neutralisés par les antioxydants. Le stress acide est le principal stress qui menace la croissance des bactéries lactiques, ce stress à un effet sur la morphologie, la croissance et la survie des bactéries. Pour son adaptation la bactérie doit procéder à une série de réponses génétiques. Matériels et méthodes : * Exposition préalable à l'acétate Dans plusieurs erlenmeyers de 40mL de milieu frais inoculer 500uL de préculture de S.enterica Placer l'erlenmeyer dans l'incubateur sous agitation 90rpm à 37°C Mesurer la DO540nm sur 1mL toutes les 20minutes jusqu'à atteindre une densité optique d'environ 0,400 avant d'ajouter respectivement dans les différents erlenmeyers : De l'eau désionisée (témoin) 25mM d'acétate à partir d'une solution à 1,0M 50mM d'acétate à partir d'une solution à 1,0M 100mM d'acétate à partir d'une solution à 1,0M Poursuivre les mesures de la densité optique et lorsque celle-ci arrive à 0,600, diluer au dans du milieu LB * Etude de la survie au choc acide et au stress oxydatif Prendre trois échantillons de 100uL de chacune des cultures précédentes dans un eppendorf de 5mL contenants respectivement : 4mL d'eau physiologique (contrôle sans stress) 4mL de 10mM d'acide citrique au pH 3 (stress oxydatif) et attendre 30minutes 3,95mL d'eau physiologique et ajouter 50uL d'H2O2 (stress oxydatif) et attendre 15minutes 3,975mL d'eau physiologique et ajouter 25uL d'H2O2 uniquement pour le témoin et attendre 15 minutes Diluer chaque échantillon dans du Tryptone sel en Eppendorf pour un volume final de 1mL : De à pour le contrôle De à pour le stress acide De à 10-6 pour le stress oxydatif Ensemencer sur une gélose LB chaque dilution en déposant un aliquot de 100uL et en étalant avec un râteau pour déterminer les cellules viables Résultats : * Résultats des densités optiques à 540nm * Courbes de croissances Log100DO540nm en fonction du temps A 120 minutes, on a ajouté les différentes concentrations d'acétate. [...]

[...] Par exemple en présence de peroxyde d'hydrogène la bactérie va subir un stress oxydatif. Néanmoins certaines bactéries aérobies possèdent une enzyme, la catalase, qui réduit le peroxyde d'hydrogène en eau et en oxygène et ainsi diminue ses effets. Aussi nous pouvant modifier in vitro l'acidité du milieu et ainsi crée un stress acide par l'utilisation d'acide citrique qui diminue le pH du milieu, néanmoins certaines entérobactéries sont connus pour avoir développé des mécanismes de défense face à l'acidité de l'estomac et de l'intestin notamment, afin de s'y développer. [...]