Etude du phénomène d'apoptose: incubation d'une lignée cellulaire de lymphoblastome humain, avec de la déxaméthasone

Résumé du document

Le but du TP est d'étudier l'effet de la dexaméthasone sur le phénomène d'apoptose.
L'apoptose est la mort cellulaire programmée. C'est un phénomène actif qui nécessite de l'énergie et qui est mis en place par la cellule elle-même. L'apoptose permet d'éliminer proprement les cellules en excès ou indésirables.
Ce type de mort cellulaire s'oppose à la nécrose qui est accidentelle. C'est un phénomène passif et désordonné pouvant impliquer un grand nombre de cellules voisines.
La dexaméthasone est une hormone glucocorticoïde de synthèse, inductrice d'apoptose. Cette molécule a un effet anti-inflammatoire et immunosuppresseur, elle est utilisée dans le traitement de différents cancers.
L'effet de la dexaméthasone est étudié ici dans une lignée cellulaire de lymphoblastome humain, la lignée H9. Les cellules de cette lignée sont des cellules non adhérentes : elles sont en suspension.
Lors de ce TP, deux conditions sont étudiées en parallèle : traitement avec de la dexaméthasone (Dexa) et condition contrôle (sans traitement). Les effets sur l'apoptose sont étudiés à différentes durées de traitement.
Les phénomènes d'apoptose sont suivis, après traitement à la dexaméthasone, au niveau génétique avec l'analyse de l'ADN génomique sur gel d'agarose et au niveau cellulaire avec le comptage des cellules et l'observation au microscope à fluorescence.

Extraits

[...] Pourcentages de cellules mortes dans le milieu contrôle selon les groupes Pourcentage de cellules mortes dans le milieu dexaméthasone selon les groupes Observations Le pourcentage de cellules mortes diminue en fonction du temps dans le milieu contrôle, alors qu'il augmente dans un milieu contenant du dexaméthasome. Coloration des cellules à l'acridine orange : observation au microscope à fluorescence Migration des échantillons d'ADN génomique sur gel d'agarose M C D D C D D C D D 24h 48h 72h Photographie du gel d'agarose après migration et exposition aux UV Observations À 24h, une seule bande de forte intensité est visible quelque soit la condition. À 48h, il est possible de voir plusieurs bandes de faible intensité pour les conditions avec traitement. [...]

[...] Au stade ultime de l'apoptose, la fragmentation du cytoplasme entraine la formation des corps apototiques (bourgeonnement de la cellule). La formation des corps apoptotiques est due à l'activation de la caspase 3 à partir du clivage de la procaspase suite à l'induction de la mort cellulaire par apoptose. L'activation de la caspase 3 est due à une succession d'étapes dont la libération du cytochrome C de la mitochondrie vers le cytoplasme. Discussion p13 L'apoptose a plusieurs rôles physiologiques, pour la plupart nécessaires à la survie de l'individu : Modelage des formes, exemples : - Les pieds et mains sont palmés pendant le développement. [...]

[...] L'effet de la dexaméthasone est étudié ici dans une lignée cellulaire de lymphoblastome humain, la lignée H9. Les cellules de cette lignée sont des cellules non adhérentes : elles sont en suspension. Lors de ce TP, deux conditions sont étudiées en parallèle : traitement avec de la dexaméthasone (Dexa) et condition contrôle (sans traitement). Les effets sur l'apoptose sont étudiés à différentes durées de traitement. Les phénomènes d'apoptose sont suivis, après traitement à la dexaméthasone, au niveau génétique avec l'analyse de l'ADN génomique sur gel d'agarose et au niveau cellulaire avec le comptage des cellules et l'observation au microscope à fluorescence. [...]

[...] Étude du phénomène d'apoptose: incubation d'une lignée cellulaire de lymphoblastome humain, avec de la déxaméthasone Structure de la dexaméthasone upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/ . Introduction Le but du TP est d'étudier l'effet de la dexaméthasone sur le phénomène d'apoptose. L'apoptose est la mort cellulaire programmée. C'est un phénomène actif qui nécessite de l'énergie et qui est mis en place par la cellule elle-même. L'apoptose permet d'éliminer proprement les cellules en excès ou indésirables. Ce type de mort cellulaire s'oppose à la nécrose qui est accidentelle. [...]

[...] Enfin, on peut observer le début de la fragmentation du cytoplasme. Au stade ultime de l'apoptose, la fragmentation du cytoplasme entraine la formation des corps apototiques (bourgeonnement de la cellule). La formation des corps apoptotiques est due à l'activation de la caspase 3 à partir du clivage de la procaspase suite à l'induction de la mort cellulaire par apoptose. L'activation de la caspase 3 est due à une succession d'étapes dont la libération du cytochrome C de la mitochondrie vers le cytoplasme. [...]