Les effets de l’insuline et de l’hormone T3 sur le métabolisme glucidique des cellules hépatiques

Résumé du document

Les hépatocytes des cellules du foie sont indispensables à la survie d'un individu, car elles remplissent de nombreuses fonctions vitales, notamment impliquées dans la régulation du métabolisme, la détoxification d'endo et de xénobiotiques et la production de protéines et de bile.

Extraits

[...] Ce réactif, rouge/brun à l'état libre, prend une teinte bleue quand il est lié aux protéines et par conséquent possède un coefficient d'extinction molaire élevé dans le visible (à 595 nm) qui permet un dosage protéique très sensible. L'avantage de cette méthode est que le bleu de Coomassie ne fixe que les protéines, il n'y a donc plus de problème lié à la présence de contaminants. Plus précisément : le bleu de Coomassie s'adsorbe sur les acides aminés aromatiques et basiques provoquant un changement de couleur. [...]

[...] On peut supposer que l'insuline et la Triiodothyronine stimulent séparément la production de G6PDH. Dosage de l'activité G6PDH TABLEAUX DES DENSITÉS OPTIQUES EN FONCTION DU TEMPS TABLEAU 1 TABLEAU DES DENSITÉS OPTIQUES EN FONCTION DES ÉCHANTILLONS ANALYSE Quel que soit le milieu, l'activité de la G6PDH croît (les tangentes de chacune des courbes croissent plus ou moins fortement (NADPH absorbe à 450 nm)). En présence d'insuline triangles oranges), l'activité de la G6PDH croît plus rapidement. En présence de T3 carrés bleus), celle-ci augmente, mais moins rapidement que la courbe du milieu témoin mais les valeurs sont très proche. [...]

[...] CONCLUSION Le dosage de l'activité G6PDH montre que l'insuline stimule l'expression de la G6PDH et favorise la réaction biochimique qui consiste en la conversion du glucose en 6-phosphogluconolactone (voie des pentoses-phosphates), le T3 n'ayant qu'une action sur la synthèse protéique de la G6PDH sans influer directement sur son activité. Le dosage du glycogène indique que l'insuline active la glycogénogenèse et le T3, antagoniste, la glycogénolyse. Enfin, l'expression de l'hexokinase est déduite du Western-Blot, stimulée par le T3 (intensité de la bande plus importante). [...]

[...] Le surnageant est gardé µL de HCl sont ajoutés aux 500 µL de surnageant (P200) Dosage du glycogène Une gamme étalon de glycogène entre 0 et 7 mg/mL à partir d'une solution mère de 5 mg/mL de glycogène est établie et les échantillons sont dosés de la même façon que pour le dosage du glycogène étalon M2, M3). Une relation de proportionnalité lie l'absorbance à la concentration des protéines. Ce qui implique que l'augmentation de la concentration en protéines caractérise l'élévation de la Densité optique conformément à la loi de Beer-Lambert : A = E.c.L avec E (coefficient d'extinction molaire), c (concentration en protéines) et L (longueur de la cuve). [...]

[...] - Une boîte de cellules en culture. - PBS 1X (à température ambiante) - 1 mL - PBS 1X froid - 500 µL. - Une cupule de 1,5 mL. - Un tube de centrifugation. - Un sonicateur. - Pipettes de 1-5 mL (P5000), 20-200 µL(P200). Dosage des protéines totales par la méthode de Bradford. - Une cuve pour le spectrophotomètre. - Pipette 1-5 mL(P5000), 20-200 µL(P200). [...]