Biologie moléculaire : Extraction d'ADN génomique, PCR et ADN plasmidique

Thèmes abordés

Licence 3 Biologie, biologie moléculaire, extraction d'ADN génomique, ADN Acide DésoxyriboNucléique, PCR Polymerase Chain Reaction, ADN plsmidique, information génétique, cellule, tissus, groupe sanguin, bulbe de cheveu, molécule, chromosome, culture bactérienne d'Escherichia coli

Résumé du document

Le document présente deux travaux pratiques de biologie moléculaire.
TP1 : Extraction d'ADN génomique et PCR
Le but de TP est de déterminer le groupe sanguin de chaque étudiant du binôme. Pour cela, nous avons prélevé des bulbes de cheveux pour en extraire l'ADN.

TP2 : ADN plasmidique
Au cours de ce TP, nous avons extrait de l'ADN plasmidique de la culture bactérienne d'Escherichia coli. Nous avons tout d'abord pris connaissance du TP avant l'arrivée dans le laboratoire de microbiologie. Puis, nous avons pratiqué différentes manipulations. Pour enfin rédiger notre compte rendu grâce aux résultats obtenus.

Extraits

[...] L'intérêt des différentes digestions enzymatiques est de pouvoir connaître les polymorphismes de longueurs au sein de l'ADN plasmidique. Les enzymes en clivant l'ADN plasmidique vont pouvoir linéariser de nombreux fragments que l'on va pouvoirensuite étudier grâce à un gel d'électrophorèse. Nous avons obtenu les résultats suivant : On voit bien que ces résultats ne sont pas logiques. Nos fragments d'ADN plasmidique vont plus loin que les marqueurs. Or, nous savons que nous avons quand même de l'ADN plasmidique car les bandes sont fluorescentes. [...]

[...] Le volume d'acétate de sodium a été déterminée par le calcul suivant : Ci X Vi = Cm X Vm 30 X V = 0,3 X 2100 V = 21 ul Nous devions faire ce calcul car nous avions de l'acétate de sodium à 0,03M et nous voulions avoir dans notre solution d'ADN plasmidique 0,3 mM. Ensuite, nous avons laissé notre solution 15 min à -20°C puis effectuer une centrifugation 10 minutes à t/min. L'ensemble des étapes faites dans le point 4 vont servir à précipiter l'ADN plasmidique. Donc le surnageant ne contient pas encore les plasmides. [...]

[...] Cela peut être dû : A une mauvaise préparation du gel d'agarose La problème peut peut-être venir des amorces qui se sont mal hybridées lors de la PCR. Elles se sont peut être toutes hybridées avec les mêmes séquences à chaque fois ce qui pourrait expliquer qu'on soit tous AO. Le mix réactionnel à pu être mal préparé. Comme il était préparé une fois pour l'ensemble des groupes. C'est peut-être ce paramètre qui a entrainé nos résultats défectueux. V. Conclusion Pour conclure, ce TP avait pour but de nous permettre d'identifier nos groupes sanguins. [...]

[...] Nous savons que : · La MS - PCR I (261) o 216 pb à A ou B o 195 pb à O · La MS - PCR II (703) o 126 pb à B o 106 pb à A ou O Pour la première personne du binôme qui a mis son ADN dans les puits, celle-ci ne connaît pas son groupe sanguin. Etant donné que nous avons pour le mix réactionnel 261 : Un fragment à 216 et un à 195. Pour le mix réactionnel à 703 nous avons le fragment à 106 pb. Par comparaison des bandes nous pouvons donc penser que cette personne est du groupe sanguin AO. Pour la deuxième personne, celle-ci sait qu'elle du groupe AO et comme nous avons les mêmes résultats alors la logique est la même. [...]

[...] Cette molécule d'ADN est distincte de l'ADN chromosomique et se réplique de façon autonome. Les plasmides peuvent effectuer un transfert de gènes entre bactéries. On peut prendre l'exemple de la résistance des bactéries aux antibiotiques. En biologie moléculaire, les plasmides sont utilisés comme vecteur pour insérer des fragments d'ADN. Au cours de ce TP, nous avons extrait de l'ADN plasmidique de la culture bactérienne d'Escherichia coli. Nous avons tout d'abord pris connaissance du TP avant l'arrivée dans le laboratoire de microbiologie. [...]