Techniques d'immunoprécipitation

Résumé du document

Les différentes techniques d'immunoprécipitation utilisées en médecine, laboratoires de recherche ou d'analyses médicales pour identifier une protéine, une maladie etc...
Ce document traite aussi les réactions entre antigène et anticorps dans les réactions immunitaires, qui sont la base de ces différentes techniques.

Extraits

[...] l'Ac migre vers la cathode alors que grâce au choix de PH, l'Ag va migrer vers l'anode et précipiter au contact de L'Ac. Figure Electrosynérese. III-2-3 Electro-immunodiffusion : III-2-3-1-simple (élétrophorése en fusée de Laurel) Les Ags peuvent êtres quantifiés par l'élétrophorése, dans un gel contenant l'Ac, selon cette technique le PH du gel est choisi pour que les Acs soit immobiles, et que l'Ag soit chargé négativement. Les lignes de précipitations prennent une forme de fusée, d'où la hauteur est proportionnelle à la concentration de l'Ag. [...]

[...] Une deuxième électrophorèse est alors réalisée dans un plan perpendiculaire que la première pour ramener les Ags en contact des Acs contenues dans le gel et former des arcs de précipitations, dont la surface est proportionnelle à la concentration d'Ag. Figure : Electro-immunodiffusion bi-directionnelle. III-3 Immuno fixation Cette technique associe une électrophorèse à une immuno précipitation in situ, suivies d'une coloration. L'électrophorèse (sur gel d'agarose ou acétate de cellulose ) permet de séparer les différentes protéines du sérum en fonction de leurs charges. [...]

[...] - Le témoin est un sérum. IV-2- Matériel et méthodes Le premier temps consiste en une migration électrophorétique en gel d'agarose après le dépôt des Ig du sérum humain à tester dans un puits. Cette migration est effectuée en tampon alcalin de faible molarité. A la fin de cette migration, une regole transversale est creusée dans la gélose où des Ig anti-sérum humain normal y sont déposés. Ce deuxième temps immunologique consiste donc en une double diffusion dans un plan perpendiculaire à l'axe de la migration électrophorétique . [...]

[...] Le terme floculation est pratiquement synonyme de précipitation. La méthode de Ramon ( technique β ) consiste à mettre en présence, en une série de tubes, une quantité constante de toxines et de quantités décroissantes d'anti toxines. La floculation initiale apparaît au voisinage de l'équivalence. La méthode de Dean et Webb (techniques α) consiste à mettre en présence des quantités variables de toxines et une quantité constante d'antitoxine). Le tube où apparaît la première floculation traduit le rapport optimal entre Ag et Ac et correspond au rapport d'équivalence. [...]

[...] IV-4-Interprétation Interprétation des témoins : L'interprétation de l'immunoélectrophorèse se fait en comparant les arcs de l'échantillon aux arcs de témoin normal (SHN).Cette comparaison se fait sur 3 critères : - Déformation des arcs, - Apparence de l'arc (longueur, épaisseur et densité), - Distance par apport à la gouttière Interprétation des résultats : Nous pouvons noter que les chaînes α et k sont nettement déformées au même niveau, ce qui nous indique une grande concentration d'IgA, confirmant la présence d'IgA monoclonaux. Les chaînes μ et γ sont inversement affectées : -L'arc des chaînes μ est plus court et difficilement visible ce qui nous indique que la concentration d'IgM polyclonale a diminué . -L'arc des chaîne γ est plus court, ce qui nous indique que la concentration d'IgG polyclonale a diminué . Nous pouvons donc conclure que le sérum X1 possède une forte concentration d'IgA K monoclonale, ce qui a provoqué une nette diminution polyclonale des autres Ig. Figure : Interprétation. [...]