Propriétés de cellules d’hépatocarcinome humain n’exprimant plus la protéine Unr

Résumé du document

L'objectif de mon travail de recherche de Master1 a été de déterminer les conséquences de l'extinction de l'expression de la protéine Unr (Upstream of N-ras) sur la survie des cellules d'hépatocarcinome HuH-7, et sur l'expression de protéines candidates, cibles d'Unr.
Ce projet fait suite à une étude réalisée dans des cellules souches embryonnaires (ES) de souris nulles pour unr. Ces cellules montraient une résistance à l'apoptose induite par certains stress, liée à une diminution d'expression de la protéine p53, régulateur positif de l'apoptose, et à des changements d'adhérence, liés à l'induction de l'intégrine 1 en particulier.
Nous avons voulu rechercher si les conséquences phénotypiques de l'extinction d'Unr dans les cellules tumorales humaines HuH-7 avaient des conséquences similaires, compte tenu que ces cellules comme la plupart des cellules tumorales ont la particularité d'exprimer une forme mutée de la protéine p53 l'inactivant en tant que facteur de transcription. Or, une voie majeure d'induction de l'apoptose en réponse aux lésions de l'ADN dans des cellules normales mets en jeu la protéine p53. Nous allons donc rechercher d'autres voies modulées par Unr impliquées dans la réponse apoptotique des cellules HuH-7.

Extraits

[...] Matériels et Méthodes La culture cellulaire des lignées HuH-7 : La lignée cellulaire HuH-7 a été établie à partir d'un d'hépatocarcinome humain. Le temps de doublement de ces cellules est d'environ 23 heures, lorsqu'elles sont cultivées dans un incubateur à 37°C en présence de de CO2 dans un milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM avec glutamax-1, Gibco BRL) supplémenté avec les antibiotiques Streptomycine (Gibco BRL 100 µg/ml) et Pénicilline (Gibco BRL 100 µg/ml) et avec du Sérum de Veau Fœtal PAN (biotech Gmbh) dilué au 1/10ème. [...]

[...] C. Frame : The role of focal-adhesion kinase in cancer A new therapeutic opportunity. Nature Reviews Cancer Vol. 5:505- 513 N. Nicolaiew, G. Triqueneaux, F. Dautry : Organization of the human N-ras locus: characterisation of a gene located immediately upstream of N-ras. Oncogene Vol. 6:721-730 G. Triqueneaux, M. [...]

[...] Frame : Src and FAK signalling controls adhesion fate and the epithelial-to-mesenchymal transition. Current Opinion in Cell Biology 17:542-547 M. A. Cahill, R. Janknecht, A. Nordhein : Signaling pathways: Jack of all cascades. Curent Biology Vol No. 1:16-19 M. Jeffers, R. Paciucci, A. [...]

[...] La destruction des mitochondries lors de la mort cellulaire entraîne la disparition de cette enzyme. Résultats Éteindre efficacement et spécifiquement Unr Pour éteindre spécifiquement l'expression d'Unr dans les cellules HuH-7, nous avons transfecté transitoirement ces cellules par des siRNA selon la méthode utilisant la lipofectamine. La transfection a été réalisée en boite de culture 6cm contenant 3.105 cellules avec un siRNA spécifique d'une séquence de la région codante commune aux 3 ARNm unr 1040 à + 1058 ) et avec en contrôle le siRNA Sc. [...]

[...] Pellicer : Characterization of unr; a gene closely linked to N-ras. Nucleic Acids Research, Vol No 4891-4899 G. W. McLean, N. O. Carragher, E. Avizienyte, J. Evans, V. G. Brunton, M. [...]