Etude de l'interaction entre les activateurs cellulaires et la NADPH oxydase dans la cellule dendritique

Résumé du document

La destruction des micro-organismes par les cellules dendritiques nécessite l'utilisation d'un complexe actif producteur d'ions superoxyde. Ce système se nomme NADPH oxydase. L'activation de l'oxydase résulte de l'association d'un flavocytochrome b et de protéines cytosoliques. Dans les cellules phagocytaires le complexe actif a déjà été mis en évidence depuis longtemps. Il reste à être démontré dans la cellule dendritique. Mon travail dans ce rapport a été d'étudier plus particulièrement l'action des protéines formant ce système.

Dans un premier temps, les conditions expérimentales d'analyse de la NADPH oxydase ont été mises au point. La formation de western blot a permis d'obtenir les dilutions d'anticorps, le kit de révélation et l´anticorps secondaire à utiliser. Les résultats obtenus ont permis d'envisager différentes conditions d'activations et de tester les protéines du complexe.

Extraits

[...] Le rôle des activations est de voir comment réagissent les protéines sollicitées par la NADPH oxydase Sujet du rapport : Mon sujet de rapport est d'étudier si certains activateurs cellulaires modulent l'activité de la NADPH oxydase. Cela va permettre de voir si les protéines sont peu ou beaucoup produites lors de certaines activations. Partie 3 : Materiel et methode III.Matériel et méthode Pour : -la culture cellulaire annexe 3 p 39 -les solutions de l'électrophorèse et la coloration des protéines sur gel annexe 4 p 40 -les solutions pour le western blot annexe 5 p Culture de cellules dendritiques: Les cellules dendritiques sont obtenues par culture de progéniteurs myéloïdes ou, d'origine splénique. [...]

[...] Il serait intéressant de déterminer le facteur responsable de cette production. Ceci serait possible en faisant une gamme de concentrations avec chacun des activateurs. Ainsi, nous pourrions voir lequel induirait le plus la production de p47. Ces expériences permettraient de voir si cela est spécifique de p47 ou, pas. De plus, nous remarquons que la synthèse est plus forte en E.4 qu'en E.2. L'essais.2 contient seulement du LPS et, de l'INF(. Ne contenant pas d' IL4, il se pourrait que le facteur de production de p47 soit cette cytokine : l' IL4, comme le montre la figure 1. [...]

[...] La migration de Rac à la membrane se fait de manière indépendante par rapport aux facteurs cytosolique phlox. (Figure Le processus d'assemblage des protéines cytosoliques durant l'activation est un mécanisme très régulé. Il implique de nombreuses interactions entre les composants de la NADPH oxydase, et des phosphorylations essentielles à l'activation. Figure 6 : composants de l'oxydase activé. - La phosphorylation des protéines phox: Les processus de phosphorylation sont essentiels à l'activation du complexe NADPH oxydase. -Phosphorylation de p47phox : La protéine p47phox est phosphorylée sur un certain nombre de sérines lors de l'activation de la NADPH oxydase. [...]

[...] Les tubes sont laissés dans la glace pendant 5 min. puis transférés à dans une boîte isotherme pendant 24 heures et stockés dans l'azote liquide. Entre J.12 et J.15, les cellules deviennent matures et expriment des complexes CMH-II. Il y a 10 à 20.106 cellules par boîte de 15ml. A J maturation des CD avec de cellules classe II et CD 11c + Lysat cellulaire : Le lysat se fait à partir de CD matures produites par la culture cellulaire. [...]

[...] Bibliographie C.Martinon-Ego et R.Bertier_Les cellules dendritiques : chefs d'orchestre de la réponse immunitaire._ Annale Biologique Clinique, vol 58, septembre-octobre 2000. A.Fuchs_Clonage, expression et caractérisation de facteurs protéiques de l'activation de la NADPH oxydase des neutrophiles. Mise en évidence de domaines spécifiques d'interaction._ Thèse, spécialité : biologie, 1er juin 1995. N.Grandvaux_ Etude structurale et fonctionnelle de la protéine P40PHOX. Etude d'une fonction potentielle dans les lymphocytes B._ Thèse, spécialité : biologie octobre 1999. http//www.emdbiosciences.com/ numéro de catalogue : 507858. Cellule de Staphilococcus aureus pour la production de pansorbin. [...]