Outils enzymatiques

Thèmes abordés

Enzymes de restriction, schizomères, nucléases, ADN, substrat

Résumé du document

Elles font partie des nucléases (enzyme qui hydrolyse les liaisons phosphodiester des acides nucléiques) qui sont distinguées selon leur spécificité de substrat et leur niveau d'action.
Une nucléase qui reconnait ADN et ARN est une nucléase, que les ADN, desoxyribonucléase
(ADNase) et que des ARN, ribonucléases (ARNase).
Les nucléases qui agissent à l'extrémité d'une chaine sont des exonucléases et celles qui agissent au sein d'une chaine sont des endonucléase.
Les enzymes de restriction sont des ADNases qui agissent au sein des chaines d'ADN.
Ce sont donc des endonucléases spécifiques des ADN double brin.

Extraits

[...] Parfois, après infection le bactériophage ne provoque pas de lyse. Cette absence peut être due soit au phénomène de lysogénie (quand le génome du phage s'intègre sous une forme silencieuse au génome de la bactérie) soit au phénomène de restriction (quand l'ADN du phage est dégradé par des enzymes de la bactérie que l'on a appelé enzymes de restriction). Le phénomène de restriction est donc un système de défense de la bactérie. L'ADN de la bactérie n'est pas attaqué par les propres enzymes de cette bactérie : - soit parce que l'ADN ne possède pas les sites reconnus par les enzymes - soit parce que les sites sont méthylés (sur A et donc l'enzyme de restriction est inactive sur ces sites 1.3 Types d'enzymes de restriction Les enzymes reconnaissent une séquence d'ADN double brin. [...]

[...] Activité exonucléasique hydrolyse les liaisons phosphodiester à l'extrémité des chaines d'ADN à condition que le nucléotide en ne soit pas apparié. Activité exonucléasique hydrolyse les liaisons phosphodiester à l'extrémité à condition que le nucléotide en doit apparié. Elle est très importante pour retirer les amorces ARN au cours de la réplication. - TAQ polymérase C'est une ADN polymérase qui est thermostable extraite de Thermus aquaticus. Elongation à partir de l'extrémité 3'OH d'une amorce appariée à la matrice en présence des 4 dNTP. [...]

[...] coli infectés par le phage T7 T3 RNA polymérase : extraite de E. coli infectés par le phage T3 fonctionnement si l'ADN à transcrire contient le promoteur spécifique correspondant utilisation : synthèse d'ARN radioactifs NTP donc l'un est radioactif) POLYMERASES ADN polymérases transcriptase inverse matrice ARN ARN polymérases synthèse de novo (absence d'amorce) ADNpol I de E. coli trifonctionnelle fragment de Klenow pol ex taq polymérase thermostable terminale transférase sans matrice Toutes ces polymérases font l'élongation dans le sens 5'3'. [...]

[...] Origine virale : virus AMV (myeloblastose aviaire) virus de Moloney (ce sont des rétrovirus). Action : copie une matrice ARN par élongation de l'extrémité 3'OH d'une amorce appariée à la matrice. Exigences : - haute concentration en dNTP - cations - pH 8,3 - pyrophosphate de sodium inhibiteur de l'activité RNase 4dNTP/K+, Mg2+/ PPNa matrice ARN amorce 1er brin ADNc On utilise cette RT en particulier dans la synthèse d'ADNc. La synthèse d'ADNc est toujours en deux étapes : premier brin, deuxième brin. [...]

[...] Utilisation : PCR. - Transferase terminale Polymérase particulière extraite de thymus de veau. Elongation à partir d'une amorce avec 3'OH libre mais n'a pas besoin de matrice, elle fait donc une incorporation au hasard. Elle a besoin de dNTP mais peut fonctionner avec un seul type de dNTP. Amorce ADN : simple ou double brin. Utilisation pour le tailing, l'addition d'une queue composée d'un nucléotide particulier. On a donc création d'extrémités cohésives ) ARN polymérases Mode d'action des ARN polymérases Une ARNpol transcrit le brin matrice L'ARN est complémentaire du brin matrice Pendant sa synthèse, l'ARN reste apparié au brin matrice sur une courte longueur : il est antiparallèle au brin matrice. [...]