Les microscopes - panorama des technologies et techniques et de leurs modalités d'utilisation

Résumé du document

La microscopie optique est un faisceau de photons concentré dans une lentille optique. Le microscope à fond clair permet de voir les cellules vivantes et le microscope à contraste de phase permet de voir le noyau et les organites selon un indice de réfraction en différence d'intensité.
Le microscope à interférence différentielle joue sur le changement de réfraction pour observer les coupes de cellule et de tissus.

Pour préparer les échantillons biologiques,il faut au préalable déshydrater les échantillons (hydratés à l'état normal) pour en faire de fines coupes.
Pour cela on durcit l'échantillon avec des fixateurs à base d'alcool, d'éther... Lorsqu'il n'y a plus d'eau, on remplace par de la paraffine fondue à 37 °C que l'on coupe ensuite avec un microtome qui donne une fine coupe.

Extraits

[...] Les microscopes - panorama des technologies et techniques et de leurs modalités d'utilisation Microscopie optique et/photonique 1.) Définition Il s'agit d'un faisceau de photons concentré dans une lentille optique. Le microscope à fond clair permet de voir les cellules vivantes et le microscope à contraste de phase permet de voir le noyau et les organites selon un indice de réfraction en différence d'intensité. Le microscope à interférence différentielle joue sur le changement de réfraction pour observer les coupes de cellule et de tissus. [...]

[...] Le microscope électrique est l'avenant des découvertes des organites cellulaires. On utilise des électrons au lieu des photons. Ici ce n'est pas une lentille mais une bobine électromagnétique qui dirige les électrons et quand ils arrivent au niveau de l'échantillon, soit ils traversent soit ils sont réfléchis ( = électrons secondaires pour observer la surface On peut utiliser la diffraction électromagnétique ainsi que les rayons X pour pouvoir faire une analyse X pour voir la composition. ~III.) Microscope électrique à transmission 1.) Description La source d'électron est un filament qui sert de cathode. [...]

[...] On broie du tissu à pour inhiber les réactions cellulaires et on obtient des membranes fragmentées. Ensuite on fait des centrifugations à g puis 10 000g . et on obtient le surnageant et le culot à chaque fois jusqu'à avoir la fraction microsome qui contient les membranes et les ribosomes. ~VII.)Autohistoradiographie On peut observer les phénomènes dans le temps et donc observer le parcours et les synthèses, grâce à un acide aminé radioactif. On injecte pendant un temps court, pulse, et pour suivre on arrête la migration puis on fait une coupe ( pour microscope optique ou microscope électrique On y fait couler une émission photonique qui est de réduit en Ag par les rayonnements radioactifs, on peut ainsi révéler des grains d'argent et donc voir le trajet des acides aminés . [...]

[...] Il y a deux dilemmes, il faut une coupe fine car le pouvoir de pénétration des électrons est faible et faut aussi le vide Pa) pour avoir un faisceau électronique. La tension d'accélération est entre 80 à 120 kV . Le faisceau traverse des champs électromagnétiques et il y a ensuite le condensateur puis la lentille objective, la lentille intermédiaire et enfin le projecteur. 2.) Préparation d'échantillon Pour observer les cellules on les centrifuge. On déshydrate puis on remplace par un autre liquide. Le milieu d'inclusion est la résine qui est fluide quand elle est polymérisée (dans l'alcool )et qui est dure quand elle est dépolymérisée. [...]

[...] ~V.)Cryofracture C'est une technique de froid, il n'y a pas de création d'artéfact. Il y a préservation de l'eau et il faut que ce soit rapide et très froid avec du fréon. Il y en a deux types : -Organisation des membranes : on met l'échantillon dans une cloche sous vide à froid puis on fait un choc pour faire apparaître des lignes de fissure qui sont faites aléatoirement entre les protéines de la bicouche lipidique. Ensuite, on fait un ombrage métallique qui formera la relique. [...]