Microscope électronique & Méthodes d'étude de la cellule

Résumé du document

Microscope électronique & Méthodes d'étude de la cellule
Techniques de préparations conventionnelles

Extraits

[...] Coloration : contraste : les coupes sont traitées par des sels de métaux lourds : par exemple : acétate d`uranyl ou citrate de plomb Se fixe préférentiellement sur les Se fixe préférentiellement sur la nucléoprotéines membrane plasmique Remarque : Une fois fixés, les sels de métaux lourds absorbent plus ou moins les électrons et renforcent ainsi le contraste de l'image : apparition des membranes plasmiques plus sombres Technique de coloration négative (voir planche) Remarque : Certains échantillons déjà très fins (exemple les virus) ne passent pas par l'étape de coupes histologiques, et donc peuvent être observés au ME directement mais doivent subir une coloration négative qui se déroule comme suit : Préparation de la grille : Comme l'échantillon est très fin, les trous de la grille doivent être recouverts par une matière qui laisse passer les électrons : une goutte de solution de collodion est placée à la surface de l'eau (contenue dans un cristallisoir). Il se forme alors un film fin qui est déposé sur la grille. [...]

[...] Traitement des échantillons : les échantillons à observer sont mises en solution avec du phosphotungstate puis déposés sur la grille. Lorque le phosphotungstate sèche, il va délimiter de manière précise les structures à observer. Formation de l'image : les images seront en négatif : les électrons ne peuvent pas traverser les zones où se trouvent le phosphotungstate alors que les molécules qui ne sont pas occupées par le phosphotungstate laissent facilement traverser les électrons. [...]

[...] A partir d'électrons réfléchis par l'objet collectés par un détecteur, l'image de l'objet étant reconstituée sur un écran de télévision : C'est le principe du microscope électronique à balayage (MEB). Observation d'un globule rouge au MEB Observation d'un noyau au MET 2ème partie Techniques de préparations conventionnelles Techniques de cryofracture Technique de coloration négative Techniques de coupes histologiques Techniques de coupes histologiques (voir planche) Fixation et inclusion 1ère fixation : Les prélèvements de tissus sont plongés dans des aldéhydes tamponnés (glutaraldéhyde) 2ème fixation : dans du tetroxyde d'osmium (stabilise les lipides) Déshydratation : Dans des bains d'alcool à degrés décroissants Inclusion : dans de la résine époxy Coupe : le bloc de résine époxy contenant l'objet est taillé, placé dans un porte-bloc de Ultramicrotome. [...]

[...] TD : Microscope électronique & Méthodes d'étude de la cellule 1ère partie Microscope électronique à transmission Microscope optique L'outil le plus communément utilisé pour observer les structures cellulaires est le microscope à lumière ou microscope optique avec lequel la cellule est traversée par des photons (lumière) et qui permet des grossissements de l'ordre de 1000 fois. Pour observer des structures cellulaires non visibles à ces grossissements, il faut utiliser un microscope électronique (la cellule est alors traversée par un faisceau d'électrons) qui permet des grossissements qui peuvent aller jusqu'à fois. 2ème image 2[ème] image Dans ces microscopes électroniques, le faisceau de photons est remplacé par un faisceau d'électrons émis sous vide, accélérés par une forte différence de potentiel et canalisés par une série de lentilles électromagnétiques. [...]