Méthodes d'étude de la cellule

Résumé du document

Microscope optique & Méthodes d'étude de la cellule
Méthodes d'étude de la cellule au microscope optique

Extraits

[...] Le Liquide de Bouin: mélange de formol, d'acide picrique en solution dans l'eau ou l'éthanol (coagulation des protéines) et acide acétique (bon fixateur nucléaire). Est le plus utilisé. Liquide de Carnoy: mélange d'alcool + chloroforme + acide acétique. Fixe bien les noyaux. L'acide osmique (OsO4) : stabilise bien les lipides mais perte de 20% des protéines. Utilisé surtout pour les tissus nerveux et convient à la microscopie électronique. [...]

[...] Le microscope optique permet d'obtenir des grossissements de l'ordre de 1000 à 1500 fois. Dans le cas de la microscopie optique classique, la préparation observée est déposée sur la platine du microscope. La préparation est constituée de : l'échantillon (un fragment de tissu) qui est déposée sur une plaquette de verre appelée "porte objet" (ou lame en verre) et couverte d'un "couvre objet" (ou lamelle) la préparation est maintenue en place par deux pinces valets (ou crochets). La lumière fournie par une lampe est concentrée par une lentille appelée "condensateur" avant de traverser l'objet. [...]

[...] Colorants vitaux (respectant la vie de la cellule) : Rouge neutre dilué (colorant des vacuoles), Bleu de méthylène (colorant du noyau de la cellule), Vert Janus (colorant des mitochondries). Colorants létaux (tuant la cellule) : Vert de méthyle acétique (noyau de la cellule), Carmin acétique (noyau de la cellule), Hématoxyline éosine (noyau de la cellule) (voir S2 biologie animale) Liquide de Lugol ou eau iodée (l'amidon est coloré en violet ; le glycogène en brun acajou Colorant pour révéler l'anatomie végétale : Carmino vert de Mirande. [...]

[...] En effet, le prélèvement des tissus provoque leur mort : les cellules déversent leurs enzymes, ce qui provoque une autodigestion du tissu. De plus, à l'air ambiant, les prélèvements peuvent être contaminés par des bactéries, ce qui entraîne une putréfaction des tissus. La fixation peut être : - Une fixation physique (congélation -20 à -180 °C) - Une fixation chimique Fixateurs chimiques utilisés L'éthanol: fixe les glucides. Durcit les tissus. L'éthanol est utilisé pour les frottis mais non pour les pièces histologiques. Le formol (formaldéhyde): il permet blocage de la cytolyse, tue les éventuelles bactéries, est utilisé pour les pièces histologiques. [...]

[...] 10[5] Mitochondrie X 1. 10[4] Prélèvement des échantillons : Après prélèvement des fragments d'organe (fragment de foie), les tissus doivent être découpés proprement pour maintenir l'architecture tissulaire. Pour être observable au microscope photonique, un objet ou préparation doit être suffisamment mince (environ 20 um) et ce, pour permettre à la lumière du microscope de le traverser. Il doit aussi souvent être contrasté (utilisation de colorants spécifiques) pour mieux distinguer les différentes parties et mettre en évidence certains de ses constituants. [...]