Génétique moléculaire (réplication transcription traduction)

Thèmes abordés

électrophorèse, ARNm, acides nucléiques, blotting, ADN

Résumé du document

Watson & Crick :
- complémentarité des bases ATGC par 2 ou 3 liaisons H,
- bases à l'intérieur de la double hélice sur un plan perpendiculaire à l'axe,
- 2 chaînes antiparallèles (diamètre de l'hélice de 2nm/20A),
- aucune restriction dans l'enchaînement des bases
ADN recombinant à permis d'étudier l'ADN, cela consiste à recombiner in vitro 2 ADN d'origines différentes.
ADN à étudier : insert/passager
ADN vecteur : prend en charge l'insert.
Utilisés pour produire des grandes quantités de l'ADN à étudier.

Extraits

[...] Etude de la stabilité des ARNm Utilisation d'un inhibiteur de l'ARNpol II (actinomycine D ou alpha-amanitine) - addition de l'inhibiteur aux boites de culture - à différents temps, extraction des ARN - quantification du taux d'ARNm spécifique par hybridation - détermination de (dégradation de moitié d'un pole initial) Cf poly y3 [...]

[...] La nature de la solution de transfert dépend du type de membrane. - membrane de nitrocellulose : solution saline très concentrée (nécessaire pour la liaison de l'ADN à la nitrocellulose) - membrane de nylon : solution de soude dénaturante Durée? - minimum 4h - généralement une nuit - nécessité de vérifier le transfert (par la vue : diminution de l'épaisseur du gel, immerger le gel dans une solution de bromium etydium) Southern blot peut avoir un nom plus spécifique : Vacu-blot (accélération de transfert par le vide), Zooblot (Southern blot obtenu après électrophorèse d'ADN provenant de différentes espèces). [...]

[...] Estimations relatives : Comparaison de taux de transcription - taux pour les cellules traitées ou des animaux traités - _ _ _ _ _ _ témoins Nécessité d'avoir un témoin de normalisation de l'expérience, étude du taux de transcription d'un gène dont l'expression n'est pas régulée par le stimulus étudié. Nothern blotting Témoin T 1 Taux d'ARNm en présence de stimulus S 8 Conclusion : augmentation du taux d'ARNm d'un facteur 8 en présence de S. Run On 1er cas Témoin T 1 Taux de transcription en présence de stimulus S 7,5 Conclusion : augmentation du taux de transcription d'un facteur voisin de 8 en présence de S. Ceci explique l'augmentation du taux d'ARNm observée en NB. [...]

[...] Génétique moléculaire (réplication transcription traduction) En biologie moléculaire on se demande ce qu'il se passe au niveau cellulaire. Watson & Crick : - complémentarité des bases ATGC par 2 ou 3 liaisons H - bases a l'intérieur de la double hélice sur un plan perpendiculaire a l'axe - 2 chaînes antiparallèles (diamètre de l'hélice de 2nm/20A) - aucune restriction dans l'enchaînement des bases ADN recombinant a permis d'étudier l'ADN, cela consiste à recombiner in vitro 2 ADN d'origines différentes. ADN à étudier : insert/passager ADN vecteur : prend en charge l'insert Utilisés pour produire des grandes quantités de l'ADN à étudier. [...]

[...] Permet d'étudier l'ADN des bactéries en particulier lors d'un clonage moléculaire étapes (cf poly) - on ensemence des bactéries sur une membrane placée sur une gélose nutritive. - on place la boite dans une étuve à la bonne température et durant un temps suffisant pour permettre la croissance des bactéries. - deuxième étape durant laquelle on lyse les bactéries pour libérer leur contenu pour dénaturer et fixer l'ADN. Cette dernière étape permet d'obtenir des empreindes d'ADN print. Méthode des répliques : Cylindre métallique couvert d'un velours stérile, il faut que le diamètre du cylindre soit légèrement inférieur au diamètre de la boite de Petri. [...]