Etudes microscopiques des bactéries

Résumé du document

Les techniques d'examen microscopique permettent d'établir une carte d'identité de la bactérie étudiée:

Examens à l'état frais:
Un état frais : Préparation entre lame et lamelle d'une suspension bactérienne en milieu liquide ; elle permet de observer la forme et la mobilité.
Le frottis : il consiste en un étalement de la surface à étudier, suivi d'un séchage, d'une fixation et éventuellement d'une coloration; les frottis sont réaliser fréquemment pour les bactéries ou les produit contenant des bactéries.

Extraits

[...] 2e temps : décoloration o Trempage de la lame deux minutes dans une solution d'acide, suivi d'un rinçage. o Trempage la lame cinq minutes dans l'alcool à suivi d'un rinçage. 3e temps : recoloration o On recouvre la lame pendant deux minutes d'une solution de bleu de méthylène, puis on rince. L'observation s'effectue au microscope optique, avec objectif à immersion. Les mycobactéries apparaissent alors comme des bacilles rouges sur fond bleu-gris. La coloration d'Albert Coloration des bacilles diphtériques avec le colorant d'Albert 1. fixer le frottis à la flamme 2. [...]

[...] La coloration différentielle la plus connue est celle de gram Techniques de coloration usuelles : La coloration de Gram : Technique de coloration différentielle distinguant les bactéries à Gram positif des bactéries à Gram négatif sur la base de leur capacité à retenir le cristal violet, après décoloration par l'éthanol. Cette coloration est fondée sur l'action successive d'un colorant d'aniline (le cristal violet), d'iode puis d'un mélange d'alcool et d'acétone. Dans un premier temps, le colorant pénètre dans la paroi et le cytoplasme. Dans un second temps, l'iode réagit avec le colorant et le rend insoluble. La perméabilité plus grande des bactéries à Gram négatif à l'alcool permet la décoloration. [...]

[...] laver vivement à l'eau du robinet 6. sécher et examiner Les granules métachromatiques sont colorés en noir, les contours des bacilles diphtériques en vert sombre jusqu'à noir, les corps des bacilles diphtériques en vert clair. Les colorants d'Albert permettent d'accentuer les granules dans les corps des bacilles diphtériques et sont utilisés surtout pour la coloration des frottis rhino-laryngés. Examens d'éléments structuraux La mise en évidence des capsules Pour mettre en évidence la capsule chez les bactéries, on procède habituellement à la coloration à l'encre de Chine : sur le fond noir de la préparation constituée par un mélange d'encre de Chine et de la suspension microbienne, la capsule apparaît comme un halo brillant, réfringent entourant le corps bactérien. [...]

[...] Ce type de coloration comporte trois temps : l'application d'un colorant énergique à chaud ou à froid ; les décolorations successives par un acide fort puis à l'alcool à une recoloration de contraste. Le premier colorant utilisé dans les techniques classiques est la fuchsine concentrée. Un fluorochrome, l'auramine, est quant à lui utilisé pour les techniques en fluorescence. Technique de coloration La technique décrite ici est la technique classique de référence. Cependant, elle est de moins en moins utilisée en raison des risques qu'elle fait prendre au manipulateur. En effet, les colorants tels que la fuchsine sont hautement toxiques et cancérigènes, tout particulièrement lorsqu'ils sont utilisés à chaud (à cause des vapeurs). [...]

[...] La chromatine qui réagit avec le bleu de méthylène basique est donc une substance basophile Technique de coloration Sur le frottis fixé et refroidi : - Faire couler la solution de bleu de méthylène phéniqué jusqu'à ce que toute la lame soit recouverte. - Laisser agir 1 minute. - Rincer abondamment la lame avec le jet d'une pissette d'eau distillée, ou à l'eau du robinet jusqu'à élimination des colorants en excès. - Sécher à l'air ou sur une platine chauffante, ou encore sécher délicatement entre deux feuilles de papier filtre fin (ou buvard), sans frotter. - Examiner au microscope, objectif à immersion. Résultats Les bactéries sont colorées en bleu sombre. [...]