Culture cellulaire primaire & secondaire

Résumé du document

Culture cellulaire primaire & secondaire.
Culture secondaire est réalisée grâce au « repiquage ou passage » des cellules issues de la culture primaire.
Milieux de culture.

Extraits

[...] Culture cellulaire primaire & secondaire Définition : Culture consiste en des prélèvements de cellules, tissus ou organes d'un animal ou d'une plante et leur placement ultérieur dans un environnement artificiel conduisant à leur croissance. Lorsque les cellules sont retirées des fragments d'organe avant, ou pendant la culture, interrompant ainsi leurs relations normales avec les cellules voisines, on appelle cela Culture de cellules. Culture primaire Lorsque les cellules sont prélevées chirurgicalement d'un organisme et placées dans un environnement de culture approprié, elles se fixent, se divisent et prolifèrent : C'est la culture primaire. [...]

[...] Pour un pH adéquat de 7,4 : Le milieu est rouge vif Incubateur à CO2 : enceinte stérile et réglé à température de 37°c pour la mise en culture cellulaire primaire et secondaire Prolifération des cellules en culture I[aire] observées au microscope inversé Sels minéraux Les sels minéraux dans les milieux aident à maintenir l'équilibre osmotique des cellules et aident à réguler le potentiel membranaire en apportant des ions sodium, potassium et calcium Acides Aminés Comme les acides aminés sont les composants des protéines, leur présence dans les milieux de culture est indispensable. Les acides aminés essentiels doivent être inclus dans le milieu de culture car les cellules ne peuvent pas les synthétiser elles-mêmes. La L-glutamine, un acide aminé essentiel, est particulièrement importante en culture cellulaire et doit être ajoutée au milieu juste avant son utilisation à des doses bien définies. Glucose (ou galactose) Est la source d'énergie majeure pour la prolifération cellulaire Protéines et peptides Les protéines et peptiques les plus couramment utilisés sont l'albumine, la transferrine, et la fibronectine. [...]

[...] Mélanges d'antibiotiques (pénicilline et streptomycine) Sont nécessaires pour contrôler la croissance des bactéries et des levures (culture cellulaire doit se faire dans un environnement totalement stérile) Les sérums ajoutés aux milieux de culture Le sérum provenant de fœtus (ou de nouveaux nés) bovins (SVF) est couramment utilisé pour entretenir la croissance des cellules en culture. Le sérum fœtal est une source riche en : Facteurs de croissance, l'albumine, la transferrine, la fibronectine (qui permet l'adhésion cellulaire au substrat), inhibiteurs de protéases qui protègent les cellules de la protéolyse, l'apport de minéraux, (comme Remarque : L'ajout du sérum dans les milieux de culture doit être réalisé extemporanément (tout juste avant le démarrage de la mise en culture) et dans des conditions strictement stériles. [...]

[...] Vitamines Beaucoup de vitamines sont essentielles à la croissance et prolifération cellulaire. Les vitamines ne peuvent pas être synthétisées en quantité suffisante par les cellules et sont donc des suppléments importants requis en culture cellulaire. Une fois de plus, l'ajout du sérum est la source majeure de vitamines en culture cellulaire. Oligo-éléments Les oligo-éléments tels que le cuivre, le zinc, le sélénium sont souvent ajoutés aux milieux et qui sont nécessaires en très faibles quantités pour une croissance cellulaire correcte et pour le bon fonctionnement des enzymes. [...]

[...] Milieux de culture Le changement des milieux de culture est indispensable tous les 2 à 3 jours à partir de la mise en route de la culture cellulaire et, pour assurer convenablement les cultures cellulaires primaire et secondaire, les cellules exigent : Eau - ions minéraux - sources de carbone et d'énergie : glucose - source d'acides aminés - pH constant de 7,4. Les milieux de culture sont disponibles chez de nombreux fournisseurs soit sous forme de poudre soit sous forme liquide et contiennent un mélange d'acides aminés, glucose, sels minéraux, vitamines etc. Ces milieux de culture doivent contenir : Des systèmes tampon La régulation du pH est cruciale pour obtenir les conditions optimales de croissance. [...]