Lorsque notre génome s'exprime il peut le faire via plusieurs étapes dont la transcription et la traduction. Lors de l'étape de transcription, l'ADN peut donner plusieurs types d'ARN : les ARNs codants et les ARNs non codants. Les ARNs codants permettent de coder pour une protéine qui s'exprimera dans notre phénotype. Les ARNs non codants participent au bon fonctionnement de la machinerie cellulaire. Ce cours détaille le fonctionnement, et le rôle des ARns non codants.
[...] DICER prend en charge la maturation du précurseur, c'est une ribonucléase cytoplasmique, il va fabriquer le micro-RNA mature en coupant la boucle terminale Les ARNs non codants RISC (RNA induced silencing complex) prend en charge le duplex des deux molécules de RNA où il va subir sa dernière étape de maturation. Intervention d'une autre protéine : argonaute c'est une autre protéase à activité endonucléase. Cette protéine va dénaturée les duplex. Dans le duplex, un des deux brins s'appelle le brin passager et l'autre le brin guide. Argonaute 2 va ouvrir le duplex et va cliver le brin passager et garde le brin guide, qui sera la cible par complémentarité. [...]
[...] Lin14 est la cible de LIN4. Dans la partie 3' UTR de LIN14, il y a plusieurs site de complémentarité imparfaite pour le transcrit LIN4. LIN4 est transcrit dans le noyau, son ARN va subir une maturation et sera modifié. Quand LIN4 retrouve sa cible sur l'extrémité 3'UTR de LIN14, il y aura des appariements RNA-RNA par complémentarité avec LIN14. LIN 4 est transcrit et produit dans le noyau sous forme d'un long précurseur qui sera maturé en un petit ARN d'une vingtaine de nt. [...]
[...] Le siRNA mature sera sous forme de duplex avec un 3'OH sortant. Particularités : complémentarité parfaite avec la cible ARN message sera clivé, et cela entrainera le silencing. Le complexe RISC est activé lors de l'arrivé du siRNA dans le cytoplasme. L'enzyme DICER va cliver le siRNA de la même manière que les miRNA. La cible d'un siRNA sera dégradée tandis que la cible miRNA sera empêchée d'être traduite, parfois ça entraine la dégradation. Découverte de la co-suppression Injection d'un ARN double brin du gène A On attend 48 heures après l'injection On extrait les ARN Nothern blot è Diminution de l'expression du gène dépendante de la concentration du siRNA. [...]
[...] Apparition d'un complexe RISC, en même temps, la traduction de LIN14 sera inhibée. Car la présence de ces ARN collés au niveau du 3' UTR va empêcher la circularisation du messager pendant la traduction. Maturation des micro ARN Transcription dans le noyau par l'ARN polymérase II. Ces transcrits seront coiffés et polyadénylés en 3'AAA à pri –miRNA (primary miRNA). Il y aura une première maturation qui aura lieu dans le noyau, grâce à une enzyme appelée DROSHA, qui va cliver le pri-miRNA en pre-miRNA (precursor miRNA). [...]
[...] Le siARN mature possède un 3'OH sortant, complémentarité parfaite avec la cible. mARN clivé = silencing Caenorhabditis elegans Régulation temporelle de plusieurs gènes. Deux gènes lin-14 (code pour une protéine et empêche le passage des larves pour grandir à partir du stade L2) et lin-4 (gène antagoniste va commencer à être de plus en plus présent dans la cellule et va tuer les protéines lin-14 dans la cellule progressivement) 1 Les ARNs non codants Lin-4 et lin14 jouent des rôles antagonistes. [...]
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