Travaux pratiques de biotechnologie : les cellules de Malassez

Thèmes abordés

Travaux pratiques biotechnologie, cellules de Malassez, observation au microscope, centrifugation, cellules MiH3P3, cellules C6, cellules tumorales, fibroblastes, cellules immortelles, trypsine, incubation, tableaux de comptage

Résumé du document

Le but de ce TP est de déterminer le temps de doublement des cellules MiH3P3 et des cellules C6. MiH3P3 sont des fibroblastes de souris de cellules immortelles et C6 qui sont des cellules tumorales donc immortelles de rats. Pour arriver à la détermination du temps de doublement, chaque souche est comptée à deux reprises (pour plus de précision dans les valeurs), ainsi qu'à l'utilisation de différentes méthodes : mise en culture, observation au microscope, centrifugation, et comptage sur cellule de Malassez.

Extraits

[...] Résultats Les comptages correspondent à une moyenne des comptages sur 4 cellules de Malassez. Tableau de comptage sur 4 carrés de cellules de Malassez de la lignée C6 de Margot Figure 1 Tableau de comptage sur 4 carrés de cellules de Malassez de la lignée MiH3P3 de Margo​t Figure 2 Tableau de comptage sur 4 carrés de cellules de Malassez de la lignée C6 d'Alex Figure 3 Tableau de comptage sur 4 carrés de cellules de Malassez de la lignée MiH3P3 d'Alex Figure 4 Tableau d'affichage de N1= nombre de cellules en fin de culture Figure 5 Tableau des du nombre de cellules moyennes de chaque lignée et de leur temps de doublement Figure 6 Exemple pour le temps de doublement de C6 : - Mise en culture de 200 000 cellules le 18 mars 2019 à 12h30 - Ajout de la trypsine le 20 mars à 10h30 - Temps total de mise en culture : 46 h - La formule est : log2)/(log N1-log N0) log2)/(log 521875 - log 200000) =33,24 donc 33 h et 14 minutes - Pour la lignée C6, il faudra donc 33 heures et 14 minutes à la cellule mère pour se diviser en 2 cellules filles D. [...]

[...] Dans chaque boite se trouve un nombre égal de cellules ensemencé Figure 7 : Tableau récapitulatif des résultats du comptage des cellules de Malassez D. Discussion La courbe se décompose en 2 phases, premièrement la phase exponentielle correspondant à la prolifération intensive des cellules, sur la courbe cette phase se manifeste au niveau des 2 premiers pourcentages de sérum ajouté. La seconde phase visible correspond à la phase stationnaire correspondant à un ralentissement de la prolifération cellulaire visible à partir des 2 et de sérum jusqu'à cette phase est longue et stabilise la prolifération cellulaire. [...]

[...] Conclusion Pour conclure, les cellules ont besoin de nombreux nutriments, ou encore d'autres éléments pour pouvoir accrocher à la boîte de Pétri. Le sérum permet entre autres de fournir ces nutriments. La prolifération n'est pas due à la confluence des cellules, ni à l'inhibition de contact, mais aux éléments du sérum qui influe sur le nombre de cellules. La cellule de Malassez a permis de faire un comptage de lignées cellulaire, elle aurait très bien pu servir à un comptage de bactérie avec des cellules vivantes ou nous vivante. [...]

[...] Introduction Le but de ce TP est de déterminer l'effet du sérum sur la prolifération des cellules Nh3T3. A l'aide de différents pourcentages de sérum, le but étant également d'analyser et de trouver différentes phases. Comment le sérum influence-t-il l'effet de la prolifération ? Quelle est sa composition ? Le sérum est l'un des composants essentiels d'un milieu de culture. Celui- ci comprend également des acides aminés, des vitamines, des sels minéraux, du glucose, des antibiotiques Le sérum est un liquide sanguin débarrassé de ses cellules et des protéines de la coagulation. [...]

[...] Suite à ça, le surnageant est aspiré avec une pipette pasteur pour garder le culot contenant les cellules. Il y a ensuite ajout de milieu complet (100ul). Pour homogénéiser la solution, des aspirations refoulement sont requis (environ 10 à 20 fois). Pour connaître le temps de doublement de chaque lignée, il faut au préalable compter le nombre de cellules avec les lames de Malassez. En effet ul de la suspension crée est disposée entre lame et lamelle pour procéder au comptage. [...]