Sciences des biospécimens - Histologie

Thèmes abordés

Biospécimens, observations, échantillons, paraffines, colorations, histologie, adn, aspects analytiques, prélèvements tissulaires, traitement, pathologies, diagnostics

Résumé du document

Si on souhaite utiliser un échantillon pour avoir des informations sur son ADN, nous pouvons traiter l'échantillon par inclusion en paraffine. En effet, une étude scientifique a été réalisée pour étudier les aspects analytiques de l'ADN tumoral circulant (Herbreteau et al., 2017). L'ADN tumoral circulant est le plus souvent présent en quantité très limitée, il faut alors bien maîtriser le protocole d'extraction utilisé. Il est expliqué dans cet article que l'analyse du matériel tumoral nécessite un prétraitement de l'échantillon avec : une fixation au formol, suivie d'une inclusion en paraffine afin de permettre la préparation de coupes fines. Cependant, l'ADN tumoral ne possède pas les mêmes caractéristiques que l'ADN non tumoral. De cette façon, une autre étude a démontré que la fixation en formol et l'inclusion en paraffine provoquent des dommages à l'ADN, rendant plus difficile la réalisation de techniques moléculaires (notamment l'extraction de l'ADN) (Trecourt et al., 2022). De nombreuses études rejoignent ce point de vue en démontrant que le conditionnement des prélèvements tissulaires basé sur la fixation formolée et l'inclusion en paraffine ne sont pas viables pour l'étude des ARN / ADN, bien que ce traitement permette une très bonne préservation morphologique des tissus (MacGrogan et al., 2009). Des ajustements protocolaires ont été réalisés pour palier à ce problème et permettre les analyses souhaitées. De ce fait, il y a encore quelques années, l'étude de l'ARN et de l'ADN à partir de tissu fixé au formol et inclus en paraffine, semblait inconcevable en raison de l'altération des acides nucléiques par ce traitement. C'est pourtant aujourd'hui devenu une pratique courante dans de nombreuses plateformes d'oncologie moléculaire (Piton et al., 2021).

Extraits

[...] Il faut alors bien s'approprier le protocole de cette méthode. En effet, la limite de cette méthode est que la congélation est trop longue, avec un passage à -20°C avant de congeler à -80°C. Une fois les échantillons à -80°C, ils ne peuvent être préservés qu'environ 1 an. De plus, les tissus congelés sont plus épais ce qui diminue la résolution microscopique ainsi que la capture détaillée de la morphologie du tissu. Comme il s'agit de tissus congelés, ils nécessitent aussi une attention et une surveillance bien plus rigoureuses que celle requise pour les blocs de paraffine ainsi qu'un certain investissement économique. [...]

[...] (2022). Le séquençage massif et parallèle fongique sur tissus fixés en formol : Développement et intérêt dans le diagnostic intégré histo-moléculaire en Anatomie-Pathologie. Médecine et Maladies Infectieuses Formation, Supplement), S105. [...]

[...] La paraffine quant à elle, est une sorte de cire que l'on coule sur l'échantillon afin de l'envelopper. Celle-ci permet de fournir un support aux tissus pour qu'ils puissent ensuite être coupés nettement et facilement, sans être endommagés (permettant la préservation de la morphologie initiale du tissu). Pour réaliser une inclusion en paraffine il faut déshydrater les tissus avec des bains d'alcool successifs afin qu'ils puissent ensuite absorber la paraffine. Par la suite on procède à la coloration souhaitée (comme H&E). [...]

[...] Evaluation sur une série de 10 cas Herbreteau, G., Vallée, A., Knol, A.-C., Théoleyre, S., Quéreux, G., Khammari, A., Dréno, B., & Denis, M. G. (2017). Circulating tumour DNA : Analytical aspects and clinical applications for metastatic melanoma patients. Annales de biologie clinique, 619‑630. https://doi.org/10.1684/abc.2017.1305 Immunofluorescence Protocol (IF Protocol) Sino Biological. (s. d.). Consulté 11 novembre 2022, à l'adresse https://www.sinobiological.com/category/if-protocol Les Fonctions du Foie. (2014, août 14). [...]

[...] Pour l'immunofluorescence directe, il s'agit de la méthode la plus simple et la plus rapide. Son inconvénient est qu'un anticorps fluorescent ne peut examiner qu'un seul type d'antigène, ce qui est moins sensible. (Immunofluorescence Protocol (IF Protocol) Sino Biological, s. d.) Bibliographie : Brakch, N., & Kesseler, D. (s. d.). Hépatite virale Coloration Trichome Caly, M., Léon, A., Galut, M., Mariani, O., Padoy, E., & Sastre-Garau, X. (s. d.). Analyse qualitative et quantitative d'échantillons tissulaires par le procédé TissueSafe(R) en vue d'analyses morphologiques et moléculaires. [...]