La PCR ou Polymerase Chain Reaction

Thèmes abordés

Découverte en 1983 par Kary MULLIS PCR est l'abréviation de Polymerase Chain Reaction. La technique de PCR, étant très sensible, fait l'objet de nombreuses applications dans des domaines très variés Mise en application de la PCR avec le virus de l'hépatite C. transcription inverse transcriptase inverse. L'ADN polymérase thermostable couple d'amorces oligonucléotidiques complémentaires L'ADNc à amplifier Les quatre désoxyribonucléotides triphosphates constitutifs de l'ADN Dénaturation Hybridation Elongation L'avantage de la PCR c'est qu'elle est une technique très sensible, rapide et spécifique car elle est capable de générer de très grandes quantités d'acides nucléiques.

Résumé du document

Cette méthode de biologie moléculaire a été découverte en 1983 par Kary MULLIS, qui obtient le prix Nobel de Chimie en 1993.
PCR est l'abréviation de Polymerase Chain Reaction.

C'est une technique d'amplification in vitro
qui permet d'obtenir en quelques heures,
à partir d'un échantillon complexe et peu
abondant, plusieurs millions de fragments
d'ADN ou d'ARN spécifique et de longueur
définie.
Dans un premier temps, nous aborderons les nombreuses apllications dont la PCR fait l'objet, ensuite nous présenterons son principe et enfin , avant de conclure, nous verrons ses avantages et ses limites.

Extraits

[...] Un cycle reproduit trois températures différentes pendant des durées différentes et se compose alors de trois étapes : Dénaturation de l'ADN matrice (95°C) Hybridation des amorces (entre 50-55°C) Elongation d'amorce par une ADN polymérase thermostable (72°C) La durée d'un cycle est de l'ordre d'une minute. Figure 1. Evolution de la température et des différents types de brins d'ADN au cours des 4 premiers cycles de la PCR Différentes étapes de la PCR Etape 1 : la Dénaturation de l'ADN réalisée à une température de 95°C. A cette température, les liaisons hydrogènes sont rompues et on obtient de l'ADN simple brin. Etape 2 : Hybridation des amorces spécifiques sur l'ADN matrice et qui repose sur l'appariement des bases complémentaires. [...]

[...] Cependant, elle reste une technique très délicate à réaliser et à interpréter du fait : Du risque de contamination de l'échantillon qui peut conduire à de faux positifs Les virus ont un génome extrêmement variable ainsi la séquence nucléotidique recherchée n'est plus exactement identique à celle ciblée par la PCR et cela peut entraîner des résultats faussement négatifs Sensibilité à de nombreuses substances reconnues comme inhibitrices (ex : l'héparine) Choix des amorces CONCLUSION La PCR et les techniques d'hybridation permettent de quantifier les acides nucléiques viraux, et donc les virus eux-mêmes On parle alors de charge virale. (Concentration d'un virus dans le sang, elle est souvent déterminée par PCR ou RT-PCR). L'étude de la charge virale permet de suivre avec précision le développement d'une infection, de proposer des indications de traitement et d'en suivre les effets. Par exemple, la charge virale est actuellement souvent utilisée comme outil de suivi dans les infections par le virus de l'hépatite de l'hépatite de l'immunodéficience acquise (VIH ou HIV). [...]

[...] Chaque base ajoutée est complémentaire de la base correspondante du brin matrice. La Taq polymérase va synthétiser l'ADN de l'extrémité 5-prime vers l'extrémité 3-prime à 72°C. A chaque cycle, il va y avoir doublement de nombre de copies de la séquence cible d'ADN double brins précisément définie à ses extrémités que l'on va appeler « amplicon ». AVANTAGES ET LIMITES DE LA PCR L'avantage de la PCR c'est qu'elle est une technique très sensible, rapide et spécifique car elle est capable de générer de très grandes quantités d'acides nucléiques. [...]

[...] Définition PCR est l'abréviation de Polymerase Chain Reaction. C'est une technique d'amplification in vitro qui permet d'obtenir en quelques heures, à partir d'un échantillon complexe et peu abondant, plusieurs millions de fragments d'ADN ou d'ARN spécifique et de longueur définie. APPLICATIONS La technique de PCR, étant très sensible, fait l'objet de nombreuses applications dans des domaines très variés : En médecine : pour diagnostiquer des maladies génétiques (mucoviscidose, etc.), des infections virales (HIV, Hépatite bactériennes, parasitaires mais aussi des cancers En médecine légale : pour identifier une personne par son empreinte génétique dans le cadre d'une enquête judiciaire, pour un test de paternité. [...]

[...] PRINCIPE DE LA PCR Mise en application de la PCR avec le virus de l'hépatite C. La PCR est utile lors du diagnostic de l'hépatite virale C car elle peut détecter le virus même en très petite quantité dans le sang. Transcription inverse La méthode utilisée pour la détection du virus de l'hépatite C est la RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR) car, le VHC étant un virus à ARN, c'est une technique qui associe une transcription inverse suivie d'une PCR. Elle permet ainsi de synthétiser l'ADN complémentaire d'un ARN en utilisant une transcriptase inverse. [...]