Molécules antioxydantes d’une descendance de cichorium intybus : identification et mise en évidence d’une variabilité due au génotype

Résumé du document

Une analyse qualitative et quantitative des molécules antioxydantes d'une descendance issue d'un croisement entre 2 souches de cichorium intybus, K28 et K59, a été réalisée. Les feuilles de différents plants ont été prélevées et une extraction de composés phénoliques ainsi qu'une élimination de la chlorophylle a été effectuée. Des chromatographies sur couche mince et des chromatographies liquides à haute performance, réalisées dans différentes conditions, ont permises d'identifier un certain nombre de molécules antioxydantes présentent dans les échantillons et de déterminer une concentration pour certaines d'entre elles. Pour chacun des échantillons, une mesure de la concentration en phénols totaux par la méthode de dosage de Folin-Ciocalteu, ainsi qu'une mesure de l'activité anti-radicalaire par le test DPPH ont été réalisées. Pour chacune des mesures quantitatives effectuées, un test statistique a permis de déterminer l'origine des différences observées entre les plantes. Nous avons reporté la présence d'acide chlorogénique et d'acide caféique dans tous les échantillons et celle d'acide chicorique dans certains d'entre eux. Des disparités dues aux différences génotypiques ont été constatées pour : l'activité antiradicalaire, la quantité de phénols totaux, d'acide chlorogénique, d'acide caféique ainsi que celle de trois composés non identifiés.

Extraits

[...] Il aurait été préférable que chacun des binômes dispose pour ses mesures, des 3 clones d'un même génotype. Ainsi, les variations dues à l'environnement auraient pues être séparées des variations dues à l'expérimentateur. Ainsi chaque variation aurait pu être quantifié précisément. Malheureusement, le temps dont nous disposions pour l'expérience ne nous permettait pas un si grand nombre de mesures. Les profils chromatographiques obtenus par CCM et par HPLC nous ont révélés la présence dans les extraits de molécules que nous n'avons pas pu identifier. [...]

[...] Les DO de chacun des échantillons ont été converties en mg/mL puis transformées en mg/g de Matière fraîche. Mesure de l'activité pure par la méthode du DPPH : Préparation de 50mL de la solution 100µM de DPPH à partir d'une solution 500µM : La solution a été diluée 5 fois et nommée solution D. Préparation des échantillons 3µL de chaque échantillon (E37 à E48) ont été prélevés et complétés à 25µL avec du méthanol. Tous les tubes ont été vortéxés. [...]

[...] Une gamme étalon est réalisée avec différentes dilutions d'un mélange des trois standards : l'acide caféique, l'acide chlorogénique et l'acide chicorique. Le logiciel de traitement des données utilisé est le Shimadzu LCsolution. Les aires des pics des chromatogrammes ont été traités puis converti en concentration en mg/mL par ce logiciel. Traitement informatique des données Le logiciel Excel a été utilisé pour les calculs de conversions des DO en concentrations (à l'aide des courbes étalons) et des formules statistiques. Conversion des DO en concentrations Le coefficient directeur obtenu pour chacune des courbes étalons (DPPH et Folin-Ciocalteu) a été déterminé. [...]

[...] Une fois les résultats obtenus, une analyse statistique a été effectuée afin de s'assurer que les différences observées étaient dues aux différences entre les génotypes étudiés et non aux variations de l'environnement ou de manipulation. Dans cette optique nous avions réalisés des répétitions de ces différentes conditions. Matériel et méthodes Description du matériel végétal utilisé Des plantes de cichory intybus issues du croisement entre les parents K28 et K59 ont été cultivées en serre à l'université des sciences et technologies de Lille. Des clones ont été réalisés pour chaque génotype. Les feuilles de 24 plantes ont été prélevées et congelées dans l'azote liquide. [...]

[...] Evaporation au Speed-vac® : Chaque échantillon a été évaporé au Speed-vac® pendant 1 minute afin d'obtenir un résidu sec. Resolubilisation/Elimination de la chlorophylle : Chaque résidu sec à été resolubilisé dans 750µL de chloroforme puis vortexé pendant 1min. 750µL d'eau ultra pure ont ensuite été ajouté dans chacun des tubes resolubilisé. Les tubes ont alors été centrifugés (13900rpm ; ; 10min). Pour chaque tube : - 650µL de la phase aqueuse sont conservés et la phase chloroformique est éliminée - 650µL de chloroforme ont ensuite été ajoutés à la phase aqueuse. [...]