Changement dans le profil d'expression des protéines des cellules NIH3T3 à la suite d'un choc thermique

Résumé du document

Le but de ce TP est de s'initier à la culture cellulaire et à l'électrophorèse des protéines. Lors du premier TP, on a mis en culture des cellules avec ou sans sérum de veau fœtal. On a soumis certaines d'entre elles à un choc thermique. On a ainsi le facteur sérum et le facteur choc thermique qui nous permet de faire des comparaisons. Lors de la deuxième séance, on a effectué une électrophorèse sur gel acrylamide des cellules cultivées à la première séance et on a réalisé un choc thermique sur d'autres cellules avant de les compter sur cellule de Malassez.

Extraits

[...] Changement dans le profil d'expression des protéines des cellules NIH3T3 à la suite d'un choc thermique Sommaire Introduction I La culture cellulaire Matériel et méthodes II L'électrophorèse 1. Matériel et méthodes 2. Résultats 3. Interprétation, discussion III Comptage des cellules sur Malassez 1. Matériel et méthodes 2. Comptage sur photographie : résultats, interprétation 3. Comptage sur cellule de Malassez : résultats, interprétation 4. Discussion Conclusion Introduction Le but de ce TP est de s'initier à la culture cellulaire et à l'électrophorèse des protéines. [...]

[...] Ce sont les cellules 44S, on compte 35 cellules mortes. Résultats Résultat 1 : Il y a plus de cellules mortes pour les cellules 37C que pour les cellules 37S Résultat 2 : Il y a plus de cellules mortes pour les cellules 44S que pour les cellules 37S Résultat 3 : Il y a plus de cellules mortes pour les cellules 44C que pour les cellules 44S Résultat 4 : Il y a plus de cellules mortes pour les cellules 37C que pour les cellules 44S Interprétation des résultats Résultat 1 : L'absence de sérum induit une mort cellulaire. [...]

[...] On pourra ainsi comparer les cellules avec ou sans sérum, et les cellules avec ou sans choc thermique. II - L'électrophorèse 1. Matériel et méthodes L'électrophorèse est une technique de séparation des protéines selon leurs masses moléculaires. L'électrophorèse se fait sur gel de polyacrylamide en présence de milieu dénaturant: le SDS (dodécyl sulfate de sodium). Le gel de polyacrylamide permet d'avoir un milieu stable et chimiquement inerte. Le SDS est un détergent anionique qui entoure les protéines d'une charge négative en cassant les liaisons hydrogène. [...]

[...] Le but du TP était d'observer les conséquences d'un choc thermique sur les cellules, et l'utilité du sérum pour y faire face. Grâce à l'électrophorèse, nous avons identifié une protéine : le Bovine Sérum Albumen, présente dans le sérum fourni aux cellules. De plus, grâce au comptage, nous avons mis en évidence une mort cellulaire après choc thermique, et une atténuation de cette mort cellulaire en présence de sérum. L'association de ces deux résultats nous permet de dire que c'est la protéine BSA qui est à l'origine de la résistance des cellules vis-à-vis du choc thermique : c'est la protéine de choc thermique. [...]

[...] Il y a moins de cellules mortes à 37S qu'à 44S : le choc thermique tue les cellules. Il y a aussi moins de cellules mortes à 44S qu'à 44C : les cellules avec sérum supportent mieux le choc thermique. On trouve les mêmes résultats que lors de l'identification des cellules mortes grâce aux photographies Discussion, comparaison des résultats Dans notre groupe, on a trouvé de cellules mortes à 37C et à 37S alors que l'on devrait en avoir plus à 37C qu'à 37S. [...]