Les vecteurs de clonage

Thèmes abordés

Vecteurs de clonage, ADN, cellule hôte, eucaryotique, plasmide, enzyme, Chromosome, génome.

Résumé du document

Un vecteur c'est une petite molécule d'ADN qui a la capacité d'être incorporée dans une cellule hôte
(d'habitude une bactérie, mais cela peut être des cellules végétales).
Les propriétés de ces vecteurs c'est qu'il est capable de se répliquer de façon autonome dans une
cellule hôte donnée.
Cela veut dire qu'il a une origine de réplication propre (d'origine eucaryotique ou procaryotique) qui
lui permet de se multiplier au sein de cette cellule hôte et ceci de façon indépendante vis à vis du
génome de la cellule hôte.

Extraits

[...] Avant ces techniques on extrayait le facteur de coagulation à partir de grande quantité de sang mais malheureusement on ne savait pas que le sang pouvait être infecter par exemple par l'hépatite C. C'est la fameuse affaire du sang contaminé. Le 2ème exemple ce sont les hormones de croissance. Certains enfants manquent d'hormones de croissance, donc on leur a donné des hormones de croissance sauf qu'elles étaient extraites d'hypophyse humaine. Là on a donné la maladie de Creutzfeld-Jacob. C'est pareil pour l'insuline. [...]

[...] Ce système consiste à utiliser le fait qu'au sein des plasmides on a un gène qui est le gène Lac Z. C'est le gène qui code pour la béta galactosidase. Notre site de coupure est généralement situé au sein du gène Lac Z donc quand on a incorporé un morceau d'ADN on coupe le plasmide avec par exemple SmaI. Si maintenant à l'endroit de la coupure on insère un fragment d'ADN, ce fragment perturbe le gène Lac Z qui n'est donc plus fonctionnel. Par contre si rien n'est inséré, ce gène reste fonctionnel. Ensuite on met un produit, le X-Gal. [...]

[...] La seule région dont on doit respecter l'intégrité sous peine de perdre le plasmide, c'est l'origine de réplication faute de quoi il ne pourrait plus se multiplier et donc ça représente une dizaine ne nucléotides. III Principes généraux d'utilisation d'un vecteur Il y a 4 étapes : la préparation du vecteur en parallèle la préparation de l'ADN à insérer réalisation à proprement parler c'est à dire qu'on met l'ADN en présence du vecteur incorporation du recombinant à l'hôte. La première étape c'est la préparation du vecteur. On utilise le site de clonage. [...]

[...] Il n'existe pas de vecteur universel mais des types de vecteurs. Le choix de tel ou tel type de vecteur dépend de ce que l'on veut en faire après. Les vecteurs les plus petits, ce sont les plasmides. Ils peuvent incorporer jusqu'à 10kb de fragments d'ADN. Ensuite on a des phages qui sont en quelque sorte des parasites de bactéries, ils peuvent incorporer 25kb. Ensuite il y a les cosmides, les phages les BAC qui peuvent incorporer des fragments plus grands. [...]

[...] Ce gène représente 0,08% de l'organisme. Les gènes les plus classiques font entre 2 et 5kb. Celui de la béta globine représente 0,00005%. C'est très difficile d'isoler un gène à partir de cette population d'ADN complexe donc pour travailler sur ces gènes-là on a deux possibilités : soit on les amplifie de façon spécifique, à ce moment-là on a deux stratégies : le clonage l'amplification de gènes soit le détecter, c'est l'hybridation moléculaire I Propriétés des vecteurs de clonage Un vecteur c'est une petite molécule d'ADN qui a la capacité d'être incorporée dans une cellule hôte (d'habitude une bactérie, mais cela peut être des cellules végétales). [...]