Transport du glucose à travers la paroi intestinale du rat

Résumé du document

[...] Préparation du rat

Le rat est anesthésié avec l'équithésine au lieu de l'uréthane. En effet, nous étudions le transport du glucose donc nous n'utilisons pas l'uréthane qui a un effet hyperglycémiant. Nous avons à disposition que des rats femelles. L'animal est placé sur le dos et fixé à l'aide de cordes sur une planche de contention.
La préparation nécessite de pratiquer une laparotomie consistant en l'ouverture de la cavité abdominale par une incision. On repère ensuite l'estomac, le pylore (partie terminale de l'estomac qui sert de jonction avec l'intestin grêle) et le duodénum (première partie de l'intestin grêle).

[...] - Premier rat

On dégage l'intestin et on en prélève 35 cm. Il faut faire attention à toujours humidifier les tissus, car ils sont vivants. On met notre prélèvement dans une boîte de Pétri contenant du KRP (Krebs-ringer-phosphate) pour le rincer et on le coupe en cinq parties égales. Les cinq parties sont mises dans une autre boîte de Pétri contenant du KRP. On pratique ensuite une éversion de chaque morceau d'intestin. L'éversion est nécessaire pour que la muqueuse intestinale se trouve en contact avec le milieu d'incubation.
Pour cette technique, in vivo, on place un cathéter en plastique contre la séreuse de l'intestin et on pousse sur l'épithélium pour que l'intestin se retourne. Expérimentalement, on obtient la muqueuse de l'intestin avec les entérocytes (les cellules les plus internes de l'intestin grêle) à l'extérieur et la séreuse à l'intérieur (...)

Extraits

[...] Nous avons vu ci-dessus qu'il existait une pompe Na/K+ dans le transfert de glucose, s'il n y a pas de sodium, cette pompe ne fonctionne pas. De plus s'il n y a pas de sodium, on voit qu'il n y a pas d'entrée de glucose, on peut donc penser que cette entrée s'effectue par un couplage glucose-sodium. A la suite de ces observations nous pouvons en déduire les mécanismes de l'absorption intestinale. En effet, dans les conditions in vivo, l'entrée de glucose depuis la lumière de l'intestin grêle vers l'entérocyte qui est la cellule dédiée à l'absorption et la plus interne de l'intestin grêle, se fait grâce à des protéines de transport situées dans sa membrane plasmique. [...]

[...] Dosage du glucose La méthode utilisée est un dosage colorimétrique du glucose donc la mesure se fait au spectrophotomètre à 500 nm, qui est la longueur d'onde adéquate. Le KRP contient le glucose. On utilise un système enzymatique qui réagit avec le glucose et qui donne une réaction colorée qui dépend de sa concentration. On prépare les différents tubes à doser en même temps de la façon sui vantes : On les porte 10 min au Bain Marie à C puis quand la réaction enzymatique a eu lieu, on lit les densités optiques des standards et des échantillons expérimentaux. [...]

[...] Deuxième rat On prélève l'intestin comme précédemment, sauf que dans cette situation on met une moitié dans une boîte de Pétri contenant du KRP et l'autre moitié dans une boîte de Pétri contenant du KRP sans sodium pour les rincer. Puis on recoupe chaque moitié d'intestin en deux parties égales que l'on remettra dans les mêmes milieux respectifs. Nous effectuons là aussi une éversion pour faire les sacs intestinaux. Les deux sacs qui étaient dans la solution de KRP sont remplis de KRP et d'Ouabaïne. [...]

[...] En effet, chaque sac provient d'une partie de l'intestin, donc situé à des niveaux différents de celui-ci (duodénum, jéjunum Nous savons que suivant la partie de l'intestin, il y a des variations d'absorption. Les sucres sont principalement absorbés au niveau du jéjunum (partie haute de l'intestin), donc nous pensons que les sacs intestinaux possédant une plus grande concentration de glucose font partie du jéjunum de notre rat. V. Conclusion générale Nous avons vu dans ce TP le transport du glucose à travers la paroi intestinale du rat. Nous avons constaté que le co-transport glucose-sodium ne consomme pas directement d'énergie mais utilise la différence de concentration en Na+. [...]

[...] Dans les conditions A qui sont les conditions normales ; en présence d'oxygène et de KRP (glucose, sodium, phosphate on peut voir que la concentration en glucose de l'intérieur du sac augmente. Cette augmentation traduit donc une entrée de molécules de glucose à travers la membrane de l'intestin. Dans les conditions le barbotage d'oxygène est remplacé par de l'azote. On voit cette fois ci que la concentration interne du sac en glucose baisse. Il n'y a donc pas eu de transferts de glucose de l'extérieur vers l'intérieur du sac. [...]