Immunologie : travaux pratiques

Résumé du document

Diagnostic de grossesse

1) Intérêt

On réalise un test qualitatif pour détecter l'hormone choriogonadotrophique (hCG) dans l'urine afin de diagnostiquer une grossesse (en effet, après conception une concentration importante d'hCG apparaît rapidement ce qui en fait un très bon marqueur de grossesse) (...)

Extraits

[...] On dépose trois gouttes d'urine sur le dispositif puis on patiente quelques minutes. L'urine va migrer sur la membrane chromatographique par capillarité : - S'il y a apparition rapide de 2 bandes mauves il y a eu réaction Ag (hCG) Ac (anti-hCG) : Test POSITIF - S'il n'y a apparition que d'une bande (au niveau de la zone de contrôle) : Test NEGATIF (attendre 10 minutes pour confirmer) Résultat et interprétation Très rapidement apparition de deux bandes : notre test est positif. [...]

[...] Facteur Rhumatoïde Intérêt et principe On utilise un test d'agglutination latex sur lame pour déterminer de manière qualitative la présence du Facteur Rhumatoïde dans le sérum d'un patient. Le FR est en fait un auto-anticorps appartenant à plusieurs types d'immunoglobulines (IgM le plus souvent) dirigé contre la partie constante et cristallisable des IgG. La présence du FR est un élément essentiel du diagnostic de la polyarthrite rhumatoïde : il s'agit d'une maladie chronique dont l'origine n'est pas connue et qui est généralement caractérisée par une inflammation et une douleur des articulations, ainsi que par une inflammation dégénérative des muscles et de la membrane tissulaire synoviale. [...]

[...] C1 Contrôle négatif : 5 U/ml avec une fourchette de 0 à 20 U/ml C2 Contrôle positif : 85 U/ml avec une fourchette de 80 et 110 U/ml Seuil de positivité si concentration en Ac anti C1q supérieure à 30 U/ml Graphiquement, on constate que le contrôle négatif et le contrôle positif sont bien compris dans la fourchette donnée : les résultats sont donc interprétables. Sur les 8 sujets testés, seul le patient P8 se trouve largement au dessus de 30 U/ml : il est donc séropositif. Le patient P5 se trouve à l'extrême limite du seuil de positivé : il faudrait alors réaliser un autre test plus spécifique pour conclure à son sujet. [...]

[...] En cas de résultat négatif, il aurait fallu prescrire un rappel du vaccin. III. Anticorps anti Toxoplasma gondii Intérêt On recherche la présence d'anticorps contre Toxoplasma gondii, le parasite responsable de la toxoplasmose, dans un sérum au cours d'une détection rapide par agglutination. Principe et nature des réactions Le test est simple et repose sur trois choses : - un réactif composé de particules de latex sensibilisés par un antigène toxoplasmique - un échantillon de sérum - une lame où l'on dépose 25 µL de notre échantillon et 1 goutte de réactif : il suffit ensuite de procéder au mélange des deux composés puis à la rotation de la lame pendant quelques minutes pour observer le résultat. [...]

[...] Elle est sensible, spécifique et automatique. Les étapes : - L'anticorps à doser, non-marqué, est incubé en présence de son antigène. - Les complexes immuns qui en résultent sont ensuite versés dans un puits recouvert d'antigène. - L'anticorps marqué, tout aussi spécifique de l'Ag, est ajouté au milieu - La plaque est rincée, de sorte que l'anticorps non lié est éliminé (Plus grande est la teneur en antigène de l'échantillon, plus faible est la quantité d'anticorps qui sera capable de se lier aux antigènes du puits, d'où la "compétition.") - Un substrat est ajouté, et les enzymes restant provoquent l'émission d'un signal chromogénique. [...]