Les techniques d'étude en biologie

Thèmes abordés

Techniques, étude, biologie, microscopie optique, microscopie électronique, techniques de froid

Résumé du document

La théorie cellulaire est énoncée en 1839 par Schleiden et Schwann :
« Tous les êtres vivants sont constitués de cellules »
La microscopie optique utilise la lumière et sa nature ondulatoire
λ est la longueur d'onde en nm
Mais il existe un phénomène de diffraction néfaste : il se forme un cercle d'ondes autour du point lumineux
Limite de résolution : 0,2 µm (pouvoir séparateur) : Il s'agit de la distance minimale entre deux points lumineux

Extraits

[...] Les techniques d'étude Historique : microscope optique (≈1700) / biochimie (≈1800) / microscope électronique (≈1900) / biologie moléculaire (≈2000) 1. microscopie optique La théorie cellulaire est énoncée en 1839 par Schleiden et Schwann : « Tous les êtres vivants sont constitués de cellules » La microscopie optique utilise la lumière et sa nature ondulatoire λ est la longueur d'onde en nm Mais il existe un phénomène de diffraction néfaste : il se forme un cercle d'ondes autour du point lumineux Limite de résolution : 0,2 µm (pouvoir séparateur) : Il s'agit de la distance minimale entre deux points lumineux Il n'est donc pas possible de voir les virus Avantage : - couleur - cellules vivantes - rapidité de la préparation - pouvoir pénétrant de la lumière Trois types : - classique - contraste de phase - confocale microscopie classique Très utilisé dans l'étude des tissus Permet de voir l'organisation des tissus, des types cellulaires. [...]

[...] On excise le codon start du gène à étudier et on fait de même pour le codon stop du gène de la GFP - On « colle » les deux gènes pour former le gène de fusion - On réalise une transfection c'est-à-dire qu'on introduit ce gène dans le génome de la cellule (soit grâce à un choc électrique soit grâce à un virus) - Le gène est transcrit, traduit, et aboutit à une protéine de fusion, ayant la propriété de fluorescer - On filme avec une caméra la protéine et son cheminement L'avantage de cette technique est de toujours conserver l'intégralité des propriétés de la protéine cible et plusieurs couleur sont disponibles. Utilisation de sondes nucléotidiques : hybridation in situ (FISH) : Cette technique est utilisée pour marquer directement un gène, en le révélant par fluorescence. [...]

[...] A la sortie, il y a addition des ondes en phase (très lumineuses) ou en opposition de phase (zones sombres) préparation - FIXATION : préserve l'architecture de la cellule. Utilisation de longues molécules réactives qui lient les éléments cellulaire -DESHYDRATATION LENTE : le but n'est pas d'évacuer l'eau sinon la cellule serait desséchée mais de remplacer les molécules d'eau par un solvant (acétone, alcool, toluène) - INCLUSION EN PARAFFINE : on fond la paraffine puis on trempe la cellule dedans puis on laisse la paraffine se solidifier : la cellule se retrouve alors dans un bloc de paraffine - COUPE AU MICROTOME : épaisseur de 2 à 5 µm - ETALAGE SUR LAME DE VERRE - DEPARAFFINAGE - MARQUAGES : coloration, immunomarquage etc. [...]

[...] La fracture respecte le plan des membranes, c'est-à-dire la ligne de fragilité naturelle, divisant la bicouche lipidique en deux, et passant au-dessus ou en dessous des protéines transmembranaires. On réalise un ombrage métallique, puis un dépôt de carbone. On détruit la cellule. Enfin on observe la réplique = moulage de la membrane au MET. [...]

[...] microscopie à contraste de phase La cellule est directement sous le microscope optique. On n'utilise pas de traitement, l'état est le plus proche possible du vivant : c'est une observation sans modification de la cellule. Elle est basée sur les indices de réfraction de la lumière, chaque organite possède un indice qui lui est propre, et qui sera traduit en niveau de gris. La lumière rencontre un obstacle dans la cellule ce qui décale la phase. [...]