La régulation de l'expression des gènes

Résumé du document

Opéron : unité d'expression génétique qui comprend un ou plusieurs gènes et des séquences régulatrices (promoteur et opérateur) qui régulent la transcription de ces gènes, et qui produit un ARNm polycistronique (permet de synthétiser plusieurs protéines différentes) (...)

Extraits

[...] Un cycle lysogène : Intégration du matériel génétique au chromosome de la bactérie qui le transmet à ses descendants. Utilisation comme vecteur. L'ADN recombiné est empaqueté avec les protéines du phage. Le phage se réassemble seul et reconstitue les particules infectieuses. Obtention d'un grand nombre de plage de lyse correspondant à des phages recombinés Avantages et inconvénients. Avantages : o Grande efficacité de propagation dans les bactéries. o Multiplication de façon importante. o Possibilité d'insérer des fragments de 20 à 25 kpdb. Inconvénients : o Lyse de la cellule hôte. [...]

[...] ( Vecteur recombinant = vecteur + insert Le vecteur doit comporter : Une origine de réplication (pour se multiplier dans la cellule hôte) Un ou plusieurs sites de restriction (pour insérer les fragments étrangers) Des éléments de sélection (pour tester la présence de la cellule hôte. Les plasmides. Définition Petits fragments d'ADN double brin circulaire extrachomosomique bactérien. Les différents types de plasmide. Plasmide bactérien (ou plasmide de 1ère génération) : permet à la bactérie de s'adapter très vite à un changement de milieu. 1er plasmides utilisés en génie génétique. Plasmide de 2nde génération : séquences artificielles obtenues à partir de séquences naturelles. Ex : la plasmide pBR322. [...]

[...] II) Les grandes étapdes du clonage dans un plasmide Préparation de l'insert et du vecteur Digestion par la même enzyme de restriction + déphosphorylation du vecteur pour maintenir sa linéarité. Ligation Mélange de l'insert et du vecteur en présence de T4 DNA ligase. Incubation : 16h Transformation bactérienne Traitement des bactéries pour les rendre compétentes (capables de recevoir de l'ADN étranger passivement) ( de façon chimique : CaCl2 (perméabilisation de la membrane) ( de façon électrique : électroporation Analyse des colonies bactériennes. Extraction de l'ADN plasmidique par lyse alcaline ; Digestion par une enzyme de restriction ; Electrophorèse. [...]

[...] Plasmide de 3ème génération : facilitation de la sélection : plasmide de la famille pUC. Possède : Une origine de réplication Un gène de résistance à l'ampicilline Des sites de restriction concentrés dans le MCS (multiple Cloning Sites) Le gène LacZ (gène de la β-galacsidase) ( Lorsqu'on place les bactéries avec du Xgal (substrat chomogène) et de l'IPTG (qui permet l'expression du gène LacZ), on obtient des colonies bleues (qui contiennent un plasmide vide), et des colonies blanches (qui contiennent un insert). [...]