La PCR quantitative : principe et applications

Thèmes abordés

Biologie moléculaire, génétique, microbiologie, PCRq PCR quantitative, recherche biomédicale, fluorophores, analyse de l'expression génique, étude des maladies infectieuses, ADN, ARN

Résumé du document

La PCR quantitative (PCRq) est une technique d'amplification d'acide nucléique utilisée pour quantifier la présence et l'abondance de séquences spécifiques dans un échantillon. Elle est largement utilisée en biologie moléculaire, en génétique, en microbiologie et dans de nombreux autres domaines de la recherche biomédicale. Dans ce cours, nous explorerons les principes de base de la PCR quantitative, les différents types de PCR quantitative, ainsi que ses applications courantes.

Extraits

[...] La quantité de fluorescence émise est proportionnelle à la quantité d'ADN ou d'ARN cible présente dans l'échantillon. Sondes de fusion : Les sondes de fusion, également appelées sondes de détection à haute résolution (HRM, High-Resolution Melting), sont utilisées pour la détection de variations de séquences génétiques dans la qPCR. Elles sont constituées d'une séquence d'ADN complémentaire à la région cible, marquée avec un fluorophore. Pendant l'amplification, la sonde se lie spécifiquement à la séquence cible. Ensuite, la température est augmentée progressivement, ce qui entraîne la dissociation de la sonde de la séquence cible. [...]

[...] Elle est largement utilisée en biologie moléculaire, en génétique, en microbiologie et dans de nombreux autres domaines de la recherche biomédicale. Dans ce cours, nous explorerons les principes de base de la PCR quantitative, les différents types de PCR quantitative, ainsi que ses applications courantes. Sommaire I. Principe de la PCR quantitative : A. PCR conventionnelle vs PCR quantitative B. Composants et réactifs nécessaires C. Les différentes étapes de la PCR quantitative (dénaturation, hybridation, extension, élongation) D. Les avantages et les limitations de la PCR quantitative II. Méthodes de détection et de quantification : A. [...]

[...] La quantité de fluorescence émise est mesurée en temps réel pendant chaque cycle d'amplification. En utilisant des standards de référence connus, il est possible de convertir les données de fluorescence en une quantité absolue ou relative de la séquence cible présente dans l'échantillon. La PCR quantitative offre donc une mesure quantitative de l'abondance d'une séquence spécifique dans un échantillon, contrairement à la PCR conventionnelle qui fournit seulement une présence/absence. La PCR quantitative présente plusieurs avantages par rapport à la PCR conventionnelle, notamment une sensibilité plus élevée, une plus grande précision et une plus large gamme de détection dynamique. [...]

[...] Préparez tous les réactifs nécessaires pour la qPCR, y compris les enzymes, les tampons, les désoxyribonucléotides triphosphates (dNTP), etc. Réalisation de la qPCR : Préparez les réactions de qPCR, en incluant les échantillons de référence dilués et les échantillons inconnus à tester. Effectuez les cycles de dénaturation, d'hybridation et d'extension dans l'appareil de qPCR en utilisant les paramètres appropriés. Enregistrez les données de fluorescence lors de chaque cycle de la réaction de qPCR. Analyse des données : Utilisez un logiciel d'analyse de qPCR pour extraire les courbes d'amplification pour chaque échantillon, y compris les échantillons de référence. [...]

[...] Méthodes de détection et de quantification : A. Les sondes spécifiques (sondes TaqMan, sondes moléculaires beacons, sondes de fusion) Les sondes spécifiques sont des outils utilisés dans la PCR quantitative (qPCR) pour détecter et quantifier spécifiquement une séquence d'ADN ou d'ARN dans un échantillon. Voici quelques exemples de sondes spécifiques couramment utilisées : Sondes TaqMan : Les sondes TaqMan sont des sondes hydrolytiques spécifiques utilisées dans la qPCR. Elles sont constituées d'une séquence d'ADN marquée avec un fluorophore à une extrémité et un quencher à l'autre extrémité. [...]