Étude du mécanisme utilisé par une protéine structurale pour courber l'ADN : caractérisation par mutagenèse dirigée - publié le 11/01/2008

Résumé du document

Présentation PowerPoint consacrée au mécanisme utilisé par une protéine structurale pour courber l'ADN.

Extraits

[...] - savoir si elle peut se fixer et si elle peut courber cet ADN. Étude de la protéine Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard Wt ox DM M75L W74F Wt Témoin (ADN seul)‏ Complexes ADN libre C2 C1 Gel retard avec ADN spécifique Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Analyse des résultats obtenus Wt ox DM M75L W74F Wt Témoin (ADN seul)‏ Observations différences de migration présence de plusieurs complexes pour les protéines mutantes. [...]

[...] Étude du mécanisme utilisé par une protéine structurale pour courber l'ADN, caractérisation par mutagenèse dirigée Stage effectué au CNRS d'Orléans CBM, UPR avril au 16 juin 2006 SOMMAIRE Introduction – Rappels Étude de la protéine MC1 Obtention de la protéine mutante Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard  avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Rappels Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion MC1 - protéine de type histone - présente chez les Methanosarcinaceae - 93 acides aminés principalement hydrophobes sur la surface externe - rôle de structuration de l'ADN - induit un effet de courbure en se fixant entre les paires de base - reconnaissance aléatoire avec préférence pour la séquence AAAAACACACACCCC (affinité x50)‏ Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Rappels MC1 - toutes les protéines MC possèdent certaines régions bien conservées : 4-10, 13-34, 45-58 ainsi queTrp74, Met75, Pro 76 et quelques résidus de la partie terminale. Structure Structure tridimensionnelle de MC1 Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion le but du stage était : - d'introduire une mutation au sein de la séquence de la protéine MC1. - de transformer des bactéries avec ce nouveau plasmide. [...]

[...] induction de la synthèse protéique par de l'IPTG. - purification sur colonne échangeuse d'ions. Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Étude de la protéine Étude de l'interaction AND/protéine sur gel retard But : - comparer la fixation de la protéine DM avec la protéine sauvage sur un ADN. [...]

[...] - de les cultiver - d'extraire et purifier la protéine. - de faire son analyse sur gel retard. Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Étude de la protéine Obtention de la protéine mutante - Mutagénèse dirigée : * même principe que la PCR * introduit la mutation à l'endroit voulu Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Étude de la protéine Obtention de la protéine mutante Transformation de bactéries compétentes (souche de bactéries BL21 Introduction Rappels Étude de la protéine MC1 * Obtention de la protéine mutante * Étude de l'interaction ADN/protéine sur gel retard avec un ADN spécifique Analyse des résultats obtenus Conclusion Étude de la protéine Obtention de la protéine mutante production de bactéries. [...]