Production d'anticorps monoclonaux, concept des hybridomes

Thèmes abordés

Santé - médico-social, biologie médicale, biologie, immunothérapie, fusion cellulaire, Ac Anticorps, anticorps monoclonal, immunoglobuline, hybridome, réponse immunitaire, production d'anticorps monoclonaux, immunoabsorption enzymatique, test ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay, hybridation génétique, interaction biologique, paratope

Résumé du document

Les anticorps sont les glycoprotéines sériques (liquide extravasculaire / sécrétion) mises en jeu lors d'une réponse immunitaire. On les appelle aussi immunoglobuline (Ig). Ils sont produits par les lymphocytes B (LB) maturés en plasmocytes, ils peuvent être membranaires ou solubles.

Extraits

[...] Exemples d'ACm thérapeutiques en cancérologie Objectif : tuer la cellule tumorale Utilisation pour : Bloquer/activer une voie de signalisation Induire la phagocytose Induire la lyse par le complément Induire la lyse par les cellules NK Cibler et apporter agent cytotoxique Problématiques : Trouver un Ag spécifique de cellules tumorales Accès mauvais des ACm à la tumeur. RITUXIMAB (chimérique) Il est dirigé contre le CD20. C'est un antigène membranaire qui est sur des lymphocytes B tumoraux non hodgkiniens. Il est absent dans une grande partie des cellules saines, uniquement les lymphocytes B. Le premier anticorps monoclonal autorisé par les States. Quand il se lit à l'antigène, il va activer les LT cytotoxiques et les NK, le complément et bloque la signalisation cellulaire ce qui entraine l'apoptose. [...]

[...] Spécificité par rapport aux : Antigènes proches : il faut vérifier la spécificité pour ne pas qu'il se lie à d'autres antigènes. Espèces : reconnaissance sur les antigènes d'autres espèces. Plus il reconnait d'antigène, plus il se vend. On cherche aussi son avidité, c'est l'affinité qui prend en compte plusieurs sites de liaison. On va le tester par des techniques comme le WB, ELISA . Production en masse On étudie sur des flasques et on veut environ litres. Procédés proches de la fermentation. [...]

[...] Après cela on a créé des hybridomes. On ne contrôle pas ce qu'on fusionne (myélome/LB, LT/LB, LB/LB, myélome/LT, LT/LT . Il y a une faible probabilité de fusion myélome/LB d'intérêt, l'efficacité de fusion est de Les mycoplasmes : mycobactéries sans paroi rigide qui vont venir se lier à la membrane plasmique de la cellule eucaryote. Mycoplasme sur membrane, rend la membrane rigide, empêche la fusion. Ils possèdent l'enzyme HGPRT et on ne les voit pas à l'œil nu en culture que par immunofluorescence ou PCR. [...]

[...] On met les cellules en cultures, qu'on va ensuite mettre en contact avec notre antigène. On va venir faire la fusion une semaine après la mise en contact. Problématique : échec plus fréquent, isotypes différents. La fusion cellulaire Nos cellules de rate contiennent les lymphocytes de l'animal immunisé et les myélomes vont fusionner, ils ne doivent pas produire l'Ac. Pour les fusionner, on va utiliser des agents de fusion : Chimique : poly éthylène glycol c'est un polymère qui va lier les molécules d'eau et rassemble les lipides. [...]

[...] Le type d'anticorps est en fonction du type de chaine lourde. Région variable et constante. Les régions variables forment le paratope, responsable de la reconnaissance de l'épitope qui se trouve sur l'antigène. Pas toute la région variable, mais les régions hypervariables. Test effectué dans les années 80 La pepsine coupe en dessous des ponts disulfures et la papaïne au-dessus. On les appelle les nanobodies, juste les paratopes comme chez le lama. Domaine variable VL + VH = paratope reconnaissance/liaison Ag Domaine constant dépendant de l'isotype activation du complément, liaison à des récepteurs spécifiques (phagocytose, cytotoxicité . [...]