Principes et comparaisons de la PCR et Q-PCR (Quantitative)

Résumé du document

La PCR est une méthode permettant la multiplication d'une courte séquence d'ADN (jusqu'à 2 ou 3 Kb) à partir d'une infime quantité d'ADN génomique. Cette séquence est appelée séquence cible et représente le segment d'ADN qui sera amplifié, c'est-à-dire recopié de nombreuses fois, afin d'en obtenir une quantité suffisante pour le détecter (...)

Extraits

[...] Elle est réalisée dans un tube en quelques heures. Composition du mix: ADN cible nucléotides ADN polymérase thermostable (Taq polymérase) Amorces spécifiques Tampon MgCl phases différentes à chaque cycle, à 3 températures différentes : la dénaturation l'hybridation (ou annelage) l'élongation (ou extension des amorces). La PCR quantitative Détermination du Ct Mise en place de la courbe de calibration Quantification relative et absolue PCR quantitative avec une sonde TaqMan® SYBRGreen SYBR Green Autres Systèmes Avantages et inconvénients de la PCR quantitative Avantages Quantification de l'ADN amplifié Rapidité (20 min à 2h) Absence de manipulation pour la lecture (pas d'électrophorèse) Automatisation Risque de contamination diminué Inconvénients Pas toutes spécifiques (SyBR® Green) Coût élevé Merci de votre attention Avez-vous des questions? [...]

[...] Elle est réalisée dans un tube en quelques heures. Composition du mix: ADN cible nucléotides ADN polymérase thermostable (Taq polymérase) Amorces spécifiques Tampon MgCl phases différentes à chaque cycle, à 3 températures différentes : la dénaturation l'hybridation (ou annelage) l'élongation (ou extension des amorces). La PCR quantitative Détermination du Ct Mise en place de la courbe de calibration Quantification relative et absolue PCR quantitative avec une sonde TaqMan® SYBRGreen SYBR Green Autres Systèmes Avantages et inconvénients de la PCR quantitative Avantages Quantification de l'ADN amplifié Rapidité (20 min à 2h) Absence de manipulation pour la lecture (pas d'électrophorèse) Automatisation Risque de contamination diminué Inconvénients Pas toutes spécifiques (SyBR® Green) Coût élevé Merci de votre attention Avez-vous des questions? [...]