Outils de séparation et de détection des acides nucléiques

Thèmes abordés

Outils de séparation des acides nucléiques, détection des acides nucléiques, séparer les protéines, acides nucléiques, cathode, anode, agarose, ADN, gel d'agarose, gent dénaturant, biologie, sciences

Résumé du document

elle permet de séparer les acides nucléiques en fonction de leur taille, mais peut aussi permettent de séparer les protéines en fonction de leur taille. Ces acides nucléiques sont chargés (-). Ce sont les phosphates qui assurent la charge (-). On dépose les acides nucléiques sur un gel qui a des sortes de mailles, c'est un résidu de maille qui constitue ce gel. Les molécules de petite taille circulent plus facilement au travers des mailles formées par le gel, elles migrent donc plus vite. On impose un différentiel de charge (cathode et anode).

Extraits

[...] C'est une façon de détecter les acides nucléiques. On marque à l'aide de produits radioactifs (isotopes). Le plus utilisé est le phosphore. Ce phosphore P32, il va y avoir une émission beta moins et une stabilité de cette radioactivité. On voit que quand on travaille avec ce genre d'isotope, pour marquer, on doit se protéger et travailler derrière un écran de Plexiglas. Comment ça se passe ? Quand on utilise un atome de phosphate, on inclut un dNTP. C'est un constituant de l'ADN. [...]

[...] Outils de séparation et de détection des acides nucléiques I. Électrophorèse sur gel Elle permet de séparer les acides nucléiques en fonction de leur taille, mais peut aussi permettent de séparer les protéines en fonction de leur taille. Ces acides nucléiques sont chargés Ce sont les phosphates qui assurent la charge On dépose les acides nucléiques sur un gel qui a des sortes de mailles, c'est un résidu de maille qui constitue ce gel. Les molécules de petite taille circulent plus facilement au travers des mailles formées par le gel, elles migrent donc plus vite. [...]

[...] C'est de la digoxygénine. C'est cette chose-là qu'on ajoute à la base. Comment marque-t- on avec ces 2 types d'outils ? Quand on veut marquer radioactivement le fragment, on recopie et on a grâce à un ADN polymérase, on va recopier votre fragment d'ADN qu'on souhaite marquer. Pendant la copie, on a intégré la biotin-dUTP. Au niveau du brin matrice, on avait un A. En recopiant, on a dû chercher la base complémentaire. On a donné à l'ADB polymérase, un choix. [...]

[...] Et pour former les mailles, on rajoute des catalyseurs chimiques. L'acrylamide est une maille serrée. Il y a une variation plus faible et donc des longueurs d'oligonucléotide qui peuvent être de 10 - 11 nucléotides. L'acrylamide permet aussi de séparer les protéines. • Agarose — > ADN/ARN • Acrylamide —> Protéines + ADN (parfois) l'acrylamide est beaucoup plus précis. Quand les acides nucléiques se sont déplacés dans le réseau de mailles, il faut les voir. On ne voit pas l'ADN à l'œil nu, on doit donc colorer les acides nucléiques en ajoutant un intercalant ; le BET. [...]

[...] On utilise des systèmes de films, de cassettes. Quand on ouvre cette cassette, on met le gel dans la cassette. L'autoradiographie transfert des molécules sur une sorte de membrane, qui va ensuite être en contact d'un film autoradiographie. On ferme et sur ce film, il y a une composition, la désintégration qui sort de ce gel va à des endroits précis, abîmer, faire une trace sur le film. Grâce à un fixateur, ces traces apparaissent sous forme de bande noire sur fond blanc. [...]