Les outils enzymatiques du génie génétique

Résumé du document

I) Les nucléases

Enzymes qui coupent, dégradent, digèrent, dégradent les acides nucléiques.

2 grandes catégories :
- Les endonucléases (coupent les molécules et les attaquent de l'intérieur)
- Les exonucléases (attaquent les molécules des extrémités) (...)

Extraits

[...] Les ARN pol Fabriquent de l'ARN à partir de l'ADN matrice comportant le promoteur correspondant. Transcription sans amorce dans le sens 5'(3' III) Les ligases. Les ADN ligases. Reforme les liaisons phosphodiester entre 2 brins d'ADN complémentaires. RNA ligase. Relie 2 ARN simple brin. IV) Enzymes de modification des groupements phosphate. T4 polynucléotide kinase. Transfert du phosphate d'un ATP sur l'extrémité 5' d'un ADN. Phosphatase alcaline Suppression du phosphate en 5' des ADN et des ARN ( plus de possibilité de former des liaisons phosphodiester donc plus de circularisation possible. [...]

[...] les différents types de coupures (enzymes de type II) Extrémité cohésives 5' sortant Ex : EcoRI Extrémité cohésives 3' sortant Ex : Pst I Extrémités franches (blunt ends) Ex : Hae III Fréquence des coupures ( + l'enzyme coupe fréquemment, + les fragments seront petits. ( + le site de restriction est petit, + la probabilité de le trouver dans une séquence est grande. Les isoschizomères ( 2 enzymes issues de bactéries différentes qui reconnaissent le même site de restriction et font le même type de coupure NB : Certains isoschizomères sont imparfaits Utilisation des enzymes de restriction. But : réaliser des cartes de restriction par digestion et double-digestion. Autres nucléases. Autres endonucléases. [...]

[...] II) Les polymérases d'acide simple brin. Les ADN pol ADN pol I : 3 activités enzymatiques : - Exonucléase5'(3' - Exonucléase 3'(5' - Polymérisation 5'(3' Le fragment de Kleenow de l'ADN pol I : seulement 2 activités enzymatiques : Exonucléase 3'(5' et Polymérisation 5'(3'. Utilisé pour incorporer des nucléotides marqués ou transformer une extrémité cohésive en extrémité franche par synthèse du morceau manquant. La terminale transferase : addition de nucléotides à l'extrémité 3'OH libre de l'ADN. Pas de matrice (phénomène aléatoire). [...]